关于间充质干细胞纯度的问题，主演是CD105+的问题

gsg040222

最近培养的间充质，细胞纯度一直上不去，细胞形态也正常，但是就是CD105+的表达极低，甚至有时候都到10％左右，在培养皿中，细胞贴壁也挺好的的，就是用胰酶消化（0.03％-0.24％）细胞成团较为严重，离心速率为1200r，求解答啊

随时准备下线

应该把对照和同型对照图也贴上来。我觉得问题有二，1、胰酶浓度是不是有的低导致消化时间过长？2、是不是细胞培养老了，养过了？

qq417606285

回复 gsg040222 的帖子- c8 [3 o0 f1 {% F" t% h

) N) h% k, I* l细胞成团脱落可能导致流式出问题，感觉你的胰酶浓度是不是过低导致消化时间太久了

baby00000003

从调机器换抗体做起吧～

gsg040222

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: ~# D1 J1 P9 `
0 q; w, N) m  y- @/ A# ?关于胰酶，浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内。5 R3 [- y- a7 Y7 }+ l6 q" ^: n4 H
关于培养时间，上面这张图的细胞是48h，我觉得细胞应该没有养过。

gsg040222

回复 qq417606285 的帖子: L# @3 ^5 O8 m) l: K9 _

4 |2 s0 }( T! w2 [' p胰酶浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内，时间很短，应该不存在消化时间过长的问题。

gsg040222

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, v* N7 U2 v# L$ c/ w7 Z
% p" n4 {' K% j! i4 l* P+ O但是期间有的细胞的CD105+的表达在99左右。。

fenglinzhu

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; I3 Y# l- X' v. O# ]4 r; ~: u) H
& l" N3 Z, C  {  k  U! C如果你是冻存后复苏的细胞，建议你先传一代以后再跑流式。对比过冻存细胞直接流式，冻存细胞复苏后流式，冻存细胞复苏后传一代流式，结果又比较明显的差异。

随时准备下线

. r. H# Y8 Z0 b- U/ ^8 J
& l+ ?3 D& x, l回复 gsg040222 的帖子) `2 d; l8 e! V  Y) o

$ Z5 M; ^8 v0 t/ l# f6 l$ ]8 |我用0.1%的胰酶在1min内消化没问题，但是低于1%浓度的消化时间就会延长，而且细胞消化是成片掉下来，容易成絮状，再次传代的话，细胞长的不均匀，会长出来一些细胞堆积颗粒，颗粒附近的细胞形态容易改变，这个是我的经验

gsg040222

回复 fenglinzhu 的帖子4 d1 r5 E" g7 {

2 ~6 W# x3 d& W, X! P. U' I# O5 `这个我是复苏完了做一次，传一代再做一次，传第二代再做一次，多个样本对比，都是105的问题。