|
 
- 积分
- 3700
- 威望
- 3700
- 包包
- 15164
|
补发一下目录，请海洋帮忙修改补充到四楼吧# w' b5 T! q. }; _* j0 v; Y
+ k% H; D$ ?; e) c# y3 q
目录: " {# @. D2 h/ q* z. G5 I6 E: I
一、体外培养的概念0 Y' C8 r0 J4 [" \$ S
二、体外培养技术的发展历史- C+ y5 S5 K+ G0 C
(一)体外培养技术的创立& ^. o7 P0 D1 @6 y( {
(二)体外培养技术的发展. }6 [2 y+ r8 Y w9 g2 @2 b& ^
(三)我国体外培养工作的发展情况+ H$ V# @. y* o$ \) B
三、体外培养技术的主要类别+ g8 T, ?3 m+ G
四、体外培养技术的应用
4 ?6 C( M: e. e$ X% W; L- B6 K1 `2 K; n(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用
" y& `* U# D9 ]/ X(二)在肿瘤学方面的应用9 x8 n. B$ |: I+ E
(三)在微生物学领域的应用
! v2 C5 S8 c1 R! }(四)在免疫学方面的应用
: G5 j8 m: E6 O. z) k% z Y) R! P3 [(五)在药理学领域的应用. O% E' j3 V' v3 d
(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用* d2 f' L0 a$ C. w7 ?3 n
(七)在现代医学领域的应用
" L& I* F, _. X$ K) }(八)植物组织细胞培养技术的应用
) h/ Z( ^, B8 v4 m/ q/ B五、对体外培养技术的评价
0 g* d" W2 r3 l7 M. }! _6 V第一部分体外培养的基本原理与技术
. U: e4 e4 u [5 @! Q" ^1 l# a第一章从体内生存环境到体外生长条件
' X( K% O2 @% {' K; ?. R* D第一节体内细胞生存的营养条件" S j9 P7 z' C ~& c/ ?
一、水' ^" _. T6 z2 R; E- a& @
二、无机盐类
4 m4 R3 I6 u6 U( x% |6 C三、葡萄糖
, Z" U% J( f1 p: Z$ L! I四、维生素, Y% J9 d, ~$ r( N4 L1 X6 U* T6 @
五、氨基酸2 c# X6 } Q, a( I. t
第二节体内细胞生存的其它条件( P% z w# ~. V% U
一、温度
" Q. s2 p9 n7 T二、氧和酸碱度
8 {: k q5 ]) m/ t三、体液渗透压
) m1 L" b/ b9 _1 R2 `四、细胞之间的相互联系
) R' l# H3 b7 y. w第三节体外生长大环境
! U a$ H: c: }: \2 |& W一、体外培养实验室
9 ?5 D# _4 N9 V; F5 f二、体外培养的设备和器具5 T) ]3 a, Y$ Q) u9 P8 A# I
(一)大型设备和仪器 R/ M3 H/ x2 d: {) h+ ]
(二)培养器具
8 a5 K+ u* T# z第四节培养用液0 z% Y. N9 g2 G' x6 u3 c
一、水与平衡盐溶液
8 b7 u6 Z: s5 I(一)水与缓冲液' ^, U4 F# f! x |6 \; N3 M" S5 L6 E2 G
(二)生理盐水与平衡盐溶液
* x) R! x( G2 W2 q" {& _; [二、培养液" P& D- p4 y5 E0 a# f; b
(一)天然培养基$ e3 a( \9 n [$ R: A$ [% S2 m8 g
(二)合成培养基4 A. ]+ w6 P( X! B! w
(三)无血清培养基
- k' m, E( Q, ]& O+ e三、体外培养的其它常用液; J' L( L# {) M+ _: F
(一)其它常用液的类型; e$ |3 c4 P5 d
(二)其它常用液的配制
4 M$ F, C0 j, }5 o, d/ W- |第五节细胞在体外生长的其它条件9 f% |% l( V0 v% ]
一、无污染的气、液相环境
. {; S& B7 i7 R( h7 [/ w二、温度8 A+ R$ J8 p9 ?
三、生长基质( @! e" a! v/ q. y' m
第六节清洗和消毒
5 ^& D, N3 p1 i' Z# @' l一、培养用具的清洗
" H0 @" j& V* @% K3 x, u& o3 h(一)玻璃器皿的清洗, W7 Q; u) A0 S% Z
(二)胶塞和塑料用品的清洗5 ?9 L. T5 y7 j% ]6 j/ U
(三)清洗后物品的包装
! w: j- G$ `. \) ~- d5 d2 v二、培养用品的消毒和灭菌* t; m0 W# j; |8 K/ E9 u2 k0 H
(一)物理方法
) |! n* r. p, |9 W" c(二)化学方法消毒+ N! M& e! K' [: s# C8 T
第二章体外培养的基本方法和过程. G' _. w9 }0 @5 F
第一节原代培养$ J w6 H% ~# T5 N7 E/ O/ \! P/ B: D2 r
一、原代培养的过程: A' I1 L3 R8 h* f
(一)取材及培养材料的制备
) W, ?: a+ @5 g) t(二)分离(散)细胞的方法
; e4 Z1 t7 p; p$ t" R(三)接种与培养过程
* M, F9 l: c) @(四)更换培养液' K- `' P! y& f2 h4 I5 `) ^5 b
二、原代细胞培养方法的注意事项
5 l9 \ e, B7 ~2 @8 l% P- v5 x, M第二节继代培养
$ S: ?3 B" o: ?7 b3 x一、原代培养物需要传代的指标
r. |1 R1 X+ _* s# A! R9 w二、传代的过程4 Q! q* k" h$ {( w
三、传代培养的注意事项6 O6 N1 l5 g$ C7 s+ b+ {8 G
第三节体外培养的基本方法和技术
/ B) [1 R& m6 C5 D7 u4 N一、悬滴培养法
9 \0 [& X; m% d& W% }' a. n \(一)Maximow双盖片悬滴培养法
: _- ^" P. M6 s1 f s+ ]+ ~(二)改良的植块悬滴培养法9 H* C2 x+ f- |1 ]' B5 W4 P3 W
二、培养瓶培养法
$ Z/ |0 z6 x" n# m/ b3 }" z; I- {* \三、盖玻片培养法
" T/ M8 J1 w, G* q+ }1 K四、旋转管培养法# F9 i3 _5 |/ n) G y6 M( S) Q( w
五、灌注小室培养法7 M' i) z# K1 A9 A/ S
六、培养板培养法# O: l- b" ?* o$ S" _' s
七、二倍体细胞培养法2 ~3 v8 c+ Q: o @7 c
八、克隆培养法
! e: t5 T8 ~5 u# Z9 J# S5 u九、中空纤维细胞培养技术# {3 g/ U! Z; b! m
十、微载体细胞培养法
: A: y: l6 ~8 m2 e十一、微囊培养技术
4 [1 F5 |1 ?. L1 P第四节培养物的冻存与复苏
1 B/ ]+ E% p% @8 J一、培养物的冷冻保存与复苏原理4 g; S' E- P5 J* ]: ~
(一)冷冻速率# h) P) E7 o) F7 J
(二)冷冻保存温度
. V" G" a6 G) q g2 o, g(三)复温速率
f8 F1 O; O( f. F+ y9 d(四)冷冻保护剂* i2 V2 N" I0 j; s' L' F
二、冷冻保存方法
2 e: f3 x7 B! i; m; t+ k* I(一)非玻璃化冻存方法
o. C. d& s3 l# Y! O4 x7 Q" g9 k(二)玻璃化冻存方法
3 s$ U5 m: m5 M7 v三、冻存细胞的复苏1 @* V4 ]9 c, y8 Q7 s
(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法. i3 e$ x% t+ x* l6 u
(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法! w2 s. [/ e/ d8 p; t5 h- @2 S* z
第五节培养物的污染
! z0 z& [5 T5 i7 J1 }一、微生物污染的判断
) Z/ y7 E) n' ~# m+ ~2 x2 b1 }(一)细菌的污染及其判断
, R) B8 T/ z& r5 Y- @6 M(二)真菌的污染及其判断
& M; @: x9 T: _. }& W; J" L8 _(三)支原体的污染及其判断& h- W! d' N6 C8 ^0 ^4 Q
(四)病毒的污染及其判断
" c# {& K# g, _1 V; T二、污染的预防
. F% y& b+ k! c1 n! y- f* f三、污染的排除) N/ e- _" o0 F* a
第三章体外培养物的生长生物学) Q4 u4 b+ L% x
第一节体外细胞培养物的生长类型) r F: X- p9 A/ d
一、黏附型细胞
" Z( E& Q9 I' P4 y k(一)上皮型细胞
( h: I. [; O$ `9 q(二)成纤维细胞型细胞 z. `- A2 G( s5 S% y5 i- h
(三)游走型细胞/ a1 V, Q2 A2 k u
(四)多形型细胞4 e0 Z# X; c: Z7 e' j* b/ y
二、悬浮型细胞5 ~! u; [$ X/ X6 N' a- E$ s
第二节体外培养物的细胞生物学特点7 e. j8 k) O/ i( M6 M/ i0 ]7 y9 O5 L- Z
一、培养细胞分化状态的变化
8 l+ N1 X1 q3 {二、培养细胞的增殖能力6 F N& ?; s4 B) G1 v Y8 P8 b8 T) D
三、体外培养细胞的生长过程; C7 F: W5 H/ L, t& R! q
(一)原代培养期9 Y5 i& k8 U0 J2 i# d
(二)传代培养期8 `! o! C0 p( R& e! T8 `9 r1 D
(三)衰退期6 z8 S; H! E1 U- W/ a: j6 J
四、体外培养细胞的形态学
' k( U7 E: R, Z7 j) o, X五、植块培养物的生长生物学" l1 \9 l `- u0 T
第三节影响动物细胞体外生长的因素) `0 y ?7 |2 R9 F% S% x8 H
一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响% i# D; Y- D3 T
(一)血清的成分与作用
2 u! @$ U7 c" w(二)无血清培养液的设计及应用
4 ~1 }5 V9 M0 h( e8 L3 S4 |! l(三)生长基质成分; [: r* ?' _7 m
二、温度条件对细胞生长的影响
5 h1 q/ N3 j. h- _三、气相环境对细胞生长的影响
& Z6 w9 R# E* K% [四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响2 D U5 ]+ [" ]' c1 s
五、辐射线对细胞生长的影响% z2 `# K8 Q6 I9 b/ t: W3 F$ S1 R
六、超声波对细胞生长的影响
# n2 ?0 ^9 P6 Q' N' \) j+ q2 K七、影响细胞生长的其它因素& E c, J/ \5 F/ _1 q" u1 g
第四章细胞分离与纯化9 i, L3 l2 {( d/ J9 P7 ^4 ^! ]
第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离4 ?1 r& W2 E( c9 F/ h
第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法
& ^; o+ ]( |7 P6 G一、一步密度梯度离心法+ C0 c- S3 g3 _; U% W1 }
(一)血细胞的分离
2 X! Z- w6 ]! m: B& s' v(二)玫瑰花环细胞的分离7 [, O; q: K8 U# ]
二、等密度梯度离心法
1 F: n; X: {3 t) B$ X: o1 F- S(一)连续BSA密度梯度离心法8 e0 u. J; k9 n/ L( W: M
(二)非连续BSA密度梯度离心法+ X3 q, ]: s* m
(三)连续Percoll密度梯度离心法/ S6 q& M0 T; k* z5 R
(四)非连续Percoll密度梯度离心法
9 e( ]) r3 ?2 {% z三、速度沉降法/ q7 b. g& L, o3 k: C& [8 a) v3 j6 p
(一)低速离心速度沉降法6 }2 O E3 B( W" l3 n3 f- ?4 z" r
(二)简单策略沉降法
4 t% E8 Z) O- V/ Q6 V$ W" W(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞9 i) B% e9 |; H" B; W
(四)简单重力沉降法分离粒细胞
7 H6 g$ ^ k& Q( }& U4 H四、离心淘析分离技术
7 z9 h a% E \0 ?4 Q# h第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法
% T' t$ {/ _7 y一、自由流动电泳分离技术
; t, g+ f8 b, t+ J* {/ I! P二、密度梯度电泳分离技术
6 S+ A- r9 G+ G7 [+ Q) g+ g |. S Q第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法7 @, w' S( c$ s: \$ |5 K$ \; S
一、差速黏附处理
+ G2 S& J m% \( [+ W二、葡聚糖凝胶G10过柱法/ V. a2 `& H% V; [( @2 ~* p; x4 l# \
三、羰基铁粉法
6 F! W* T2 B8 u5 k' x( _, X四、尼龙毛分离法) s1 H( D) \, D: U$ R/ B/ \: m
第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法9 q3 u1 @/ |/ Q3 s4 ^5 v
一、免疫溶解法2 R: J+ O/ \. f) p0 D* t' j
二、盘化法
1 O5 |! U6 x" R1 r% h' O# e. x(一)直接法
9 C% R5 h/ L' z- M, L(二)间接法) b# o5 H- x" @0 }+ B+ X" I4 q
三、凝集素凝集法
! `2 v% y# d5 f8 z P(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞
3 l8 _2 W3 Z) E8 h! k(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
- f& a! F7 U' R9 q/ n0 m四、玫瑰花环分离法
2 ^$ ~. g4 n1 l* f, ~" m; a(一)E玫瑰花环分离法5 [/ \3 K$ q8 v3 S* B
(二)EA玫瑰花环分离法 u. [. a1 o8 }" X$ `. ^
(三)EAC玫瑰花环分离法
3 X& u- M$ _8 K1 K! F* o五、流式细胞分选术% g6 [6 j1 J; n6 V
(一)流式细胞仪的结构和工作原理% H8 j, E1 E; b/ f! }
(二)流式细胞术分选细胞
8 X, O0 h. ?& I8 o* C+ z六、免疫磁珠分离技术9 k) A& f1 s; `$ Y. U! {
第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法8 i/ }9 e! z9 g6 u, E2 G
一、反复植块法7 q1 \3 I& v5 w! p( h
二、有丝分裂抑制剂处理
2 R/ Z }, R: u. m/ Y ^2 J$ k( e8 u第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化' f5 h+ E8 y9 h; O
第一节细胞系(株)的建立与鉴定
" k- S1 r5 D4 V0 o一、基本概念
6 P! \& h" y0 i6 T+ w- a7 u6 `; L二、建立细胞系(株)的档案
' e7 b+ y% b) s2 c8 M三、细胞系的鉴定
: Y7 c7 h4 j4 t6 g6 }, U8 N. n(一)细胞系鉴定的内容
) ]7 Z- ~8 u7 f(二)细胞系形态学的鉴定方法
! I9 [( |; Q# p9 N( T0 `(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析! P1 S1 T: O4 O& _9 W; d5 N/ a, Y) _
(四)细胞系的同工酶酶谱检测
. ~+ A/ [8 n) I, e四、细胞系(株)的保藏
8 d# M2 H1 M9 ^8 \ x5 G! d* T五、国内部分已建立的细胞系或株名录* Y; E! _$ F3 D4 Z6 y( N# _2 P+ p' u
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录5 Z# a/ q$ F/ Y* u& ]/ {1 R, N* e
七、国外部分已建立的细胞系或株名录 P' Z$ n6 E* z
第二节细胞克隆
" E a- y4 o+ C; I5 U一、克隆培养技术
' z9 F% a! P7 ]7 Y(一)稀释铺板法
h% m! A$ H; D9 o5 @7 m( v: [(二)饲养层克隆法. Y. D3 U) U* y( N
(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
, D, S. f, A6 f8 }* E J(四)琼脂克隆法3 b' y) Q& U! H' m7 H
(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化' `1 R% {1 o H
二、影响克隆形成率的因素
. p3 u- ~0 z; f. O k% U5 l& c三、克隆的分离+ v, x0 F6 Z" O1 L& \8 z9 Z
第三节细胞周期与细胞同步化
9 @, F; R' c$ G: P2 S9 q一、细胞周期
0 K& g+ Z$ f i8 f9 I) ]- I7 T" M" S- ]二、细胞同步化) A4 F( o" T3 H, |
(一)各期细胞的分离8 |. y5 \5 L( O: k: y8 q5 N7 f
(二)细胞分裂相同步化法
5 b$ K% J* w# ~第六章器官培养) |* T8 y9 j$ |2 C
第一节器官培养技术概论& C9 _* ~/ t# G+ `$ G
一、器官培养技术的基本要点
$ _# a4 Z; \3 N% R/ a8 L! C7 ~二、器官培养技术的发展简史. N% J5 v% L1 j) x9 U- t
三、器官培养的基本原则, w$ B# s U. U% C( x2 z
(一)养分的供应与取材! I) Z, B# i2 t2 {( m! P- @) q2 r1 A
(二)抑制细胞迁移: B9 b3 W) T$ W! i4 J6 |* P
四、对器官培养技术的评价
- {, s# ?5 T. D0 O4 {* a9 [. ?五、培养器官的生存环境及影响因素( x, p+ k% a$ J, N) g9 b* i
(一)培养器官的生存条件及其影响
4 `: e: Z8 y5 B9 T I7 U% u(二)培养器官的内在因素及其影响
! i/ ?* t8 P" j8 M) J第二节器官培养的基本方法
" O2 j9 j- M9 }9 E' @一、表玻璃器官培养法
+ O2 D% P- S S+ I- [# V5 z二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)
8 r( G' b. @ Y/ k8 X$ D5 e三、悬浮培养法
- o" v; W5 V+ E9 p四、直接漂浮培养法% e1 j# K. Q( a. r* G
五、擦镜纸培养法
! P+ e$ p4 t8 T$ E六、金属格栅器官培养法/ q$ P) o' @9 d+ R% q
七、琼脂小岛器官培养法- G) a) ^0 E2 a1 r; C
八、陈氏滤纸虹吸器官培养法* o/ V) w9 ?- [3 C/ t
九、灌注式器官培养法
9 |! [( }3 ~4 `6 E* d2 {3 f十、旋转管培养法! e0 T/ H4 s& h' K: l5 x% \
十一、摇摆式器官培养法
( t. F5 Y# {" j4 E十二、器官灌注系统 V0 L3 N* H' ?6 J( m
十三、鸡胚尿囊绒膜培养法
# d8 ^( g. j3 O! C' I; V十四、早期鸡胚胚盘培养法& U# q3 c$ D$ n8 v5 s+ l; I
第三节器官培养各论# C+ t2 r! |: o
一、胚胎肢芽的器官培养0 H! ~# n7 w, t3 G. E
(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法. R. Y4 f9 F( _9 ^
(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法
5 O7 q s7 d7 u. l6 h二、胚胎性腺的器官培养
H: q0 z4 {+ {3 y9 v4 |三、软骨与骨的器官培养
- s% n! P/ g; q3 [0 v, O4 {6 N(一)软骨的器官培养# R7 j' D' w1 G8 r4 i8 f
(二)骨的器官培养7 M& k0 |/ \7 L& T; s, U/ ~! g
四、神经组织的器官培养: q: p( W- P) B5 l. c/ L
五、牙胚的器官培养9 i( E7 q5 o! i6 H% F$ j
(一)Trowell培养法培养牙胚器官; _3 \) N/ J$ J5 x# K5 S
(二)悬浮培养法培养牙胚器官8 R+ A9 f2 j5 B0 f" f& ^
六、腭板的器官培养
- M, N& d& w7 b8 Z& y5 A' \(一)腭板器官的静式培养法) B4 Y* N9 v6 y9 K
(二)腭板器官的转动培养法2 j0 x* z" J' C
七、毛囊的器官培养7 c' k: `, E5 C2 u; q, @1 b5 s
八、血管的器官培养
, u- F6 n- v" G) S# ]( a(一)血管的悬浮孵育法器官培养# ^4 ~+ b9 v" k$ T
(二)血管的琼脂孔器官培养法
" Z$ Y' S, @- p* l九、肝脏的器官培养
* K- M# ?8 G) z$ e+ J. F) E十、小梁网的器官培养0 ]' u+ r( N6 j- o6 q
十一、人胃肠黏膜的器官培养
" U* S* E" c9 h2 S) L十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养4 g+ C3 g+ _ @0 a; @6 l
十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养
" j6 g1 I; X. T% X \: ](一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备
$ q) V" N9 R7 N" h8 |. S' R(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型+ R b7 s- p& C- U! s$ g
第四节全胚胎培养
. j: B0 E1 q) Z0 ?) a一、植入前胚胎培养
4 L1 i# m* b% R: p1 x二、植入后胚胎培养* M I' K7 \ a K% ]* l
第五节器官培养的应用
& a& y% u" b1 g0 j* h一、器官培养中的形态发生研究* M2 T9 |2 Y5 d$ J- R7 v
二、器官培养与发育分化研究& U) f- M' I6 L! S
(一)外分泌腺的发育分化
6 B4 Z s$ D8 T# Y% _% u) w6 U(二)内分泌腺的发育分化' }% z4 K3 I, _% @% J" _
(三)性腺及前列腺的发育分化3 L, v- g6 u: i5 H/ D7 u3 n
(四)神经组织的发育分化; r4 w4 Y" r" U6 |+ y
(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
# V9 M( Q3 M9 |1 S: W/ ~8 X8 J7 |8 Q% C三、体外培养整个胚胎的生长发育4 ^7 T3 y6 U% o) J3 r
四、胚胎致畸作用研究
9 k8 T3 r: ^5 ~! a五、器官的功能及其代谢研究
; m& C3 G5 E! L- E$ j六、器官移植中的应用
0 M1 q6 k9 I$ X(一)器官保存+ P) r7 t& V6 @1 b7 i" A
(二)降低免疫原性, A* O, Y4 J- f
七、器官培养与肿瘤侵袭研究
2 C- V X U* ^4 }- P" i- _第七章培养物的观察检测方法
0 l0 H1 o, X7 U! `第一节活细胞的观察检测方法
" p8 N2 y) K' p3 A一、相差显微镜观察培养物的形态结构" B/ P6 j* u7 {
(一)相差显微镜
3 U& c2 {/ C7 u, ]4 w+ M$ \, ]# `3 S(二)用相差显微镜观察活细胞的方法6 S u2 D8 e2 R6 n; w' ~
(三)活细胞的动态观察与缩时电影" T% _9 C ?+ H5 r$ o$ f' H$ l
二、细胞计数法0 _ j3 ?, \, j- X4 W4 M
三、细胞生长曲线
% k$ n* O8 x1 L/ p' t9 J四、体外活体染色观察与活体染料
" m1 H1 m* n$ h9 ]( L" S5 K五、活细胞的染料排除检测法7 s: M! o6 r, Z _. ?
六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法- D/ n8 x/ [( S
七、细胞活力测定的MTT比色法5 s: s: E& O; ]7 v5 `4 i6 Z
第二节普通染色观察
1 k c& ~. q# R- T一、HE染色法8 K* l9 ?- a7 ]( h( p$ l: ^
二、吉姆萨染色法
6 Z5 H5 z# t$ ?1 L4 L% i+ j5 }三、载坡片处理方法: X0 S; o! d5 g4 o
第三节细胞化学技术
1 V$ R& a- O/ ~/ D! }一、酸性磷酸酶$ s6 U4 e; @ D ~" f
二、葡萄糖6磷酸酶/ h: c1 v2 Y$ {# I) l
三、琥珀酸脱氢酶
7 E* w2 a% |$ D2 W4 b2 P6 S四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法; [7 u9 a. E: E+ ^; _- Z8 \
五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法' n1 `, I; s. B1 I0 g, S
第四节免疫细胞化学技术
1 Q$ T1 n) w& @ {9 y一、常用免疫细胞化学技术原理
3 K# _) R0 w7 M) V% d, S* }: s二、常用的显色标记物7 p, s3 P9 f8 D1 w$ }- D. o) e
(一)辣根过氧化物酶
2 c2 h( M# G. s(二)碱性磷酸酶3 W1 B6 @ e/ E) Q& z
(三)荧光素
; P7 ^ g ?9 C# Y5 w(四)胶体金与免疫金银技术
9 j" E( i( u* N6 ~: D三、免疫细胞化学方法及标记物的选择/ ]4 V* D: G# @/ |" B, [- i
四、免疫细胞化学的一般问题
4 R; _: Q8 D7 ]/ h. ^2 E" {4 J5 }五、免疫细胞化学染色的典型程序) H# g! ^$ Z& J4 G. a, U7 \& W1 ~1 k
(一)免疫酶间接法% Z! M5 v6 k4 H( ]* S& \
(二)免疫荧光LSAB法2 G* d1 A7 E; {4 [
(三)PAP法8 D, n5 F2 c3 S. x5 p" M0 Z
(四)SPA胶体金银法
- N5 R- I9 c% M第五节原位杂交技术
3 S" @; }5 z( ~$ I! l一、探针与标记物的选择
9 s! c' ^& f/ `3 h6 r二、原位杂交技术主要实验材料( p" b# {7 I: u/ K9 r5 S# z, J
三、杂交
& S" ^( V7 T" A7 ?5 o四、显示标记物0 ~! i% ~; h* u2 Q+ D3 f" |
五、设立对照
, g" i. `2 m I& D; d' w第六节电子显微镜技术6 L: p* Y4 |; }0 ]: ?6 @
一、超薄切片技术# I* }! f+ `0 {4 v+ R, l
(一)对培养物的预处理
- S( c1 X8 Q1 I( e0 Y, d(二)标本制备
/ B- F9 l; l/ C. P& u: ?) t5 ?2 z二、电镜免疫细胞化学技术4 y* d' H2 Z$ a1 R$ @# G
(一)显示细胞表面抗原$ @) v9 U" t& x, d- h
(二)显示细胞内抗原
2 C/ M Z! Y% h5 [* r! u三、其它电镜技术简介
* h1 t, I) u8 N- [! p' e(一)扫描电镜技术
$ X1 b( N8 x1 e7 u0 [; O(二)冷冻蚀刻复型技术$ f0 M5 c4 |! G4 R" R+ e
第二部分动物基本组织的体外培养
9 K$ Y7 i! p n4 o+ j* \第八章上皮组织的体外培养
2 M9 n3 e! _7 Q a: ?5 @4 I# g1 F3 a第一节上皮组织体外培养技术概论
6 X& c R7 C$ t8 F一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点! N7 w0 N/ { H+ F7 Q/ u9 v
(一)上皮组织的形态结构+ H$ ?2 H' L8 v4 M/ T Z
(二)上皮细胞的极性
: M, m$ C G- b" `" s9 P(三)上皮细胞间的连接
D: ?% E0 U1 p1 w, `5 v二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学
$ x" ]/ C g2 Q* H: ~9 d(一)体外培养上皮细胞的形态结构, b3 Z( I$ X) k$ |" R T
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征1 _9 e7 L: z3 V% b9 U( u9 E8 q
三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测
& k9 Z/ a) ~, L# {9 V" K(一)一般形态学观察5 T' s( w* Z/ N) R; d3 i7 @
(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测$ {" c, V! k/ q h! r0 u
第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养
4 x3 v) |% N* U( n+ ?% F一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养7 z% Z. p+ o$ \' T* s/ o
二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养+ `- {( o* I( F) ~( W
三、Ⅱ型肺泡细胞的培养
% }/ {9 \5 j: m/ h) W& X$ c# _四、鼻咽上皮细胞的体外培养* p* b4 Q' b# u/ n- M
第三节消化系统有关的上皮细胞培养
$ J! _/ |! |% [2 ~一、食管黏膜上皮细胞的培养6 X& I9 g; @) ^" w1 q$ s
二、胃黏膜上皮细胞的培养
8 \- D6 g" A( y* z; {三、肠黏膜上皮细胞的培养 R4 X+ S' ?2 b7 ?) b/ a- ~2 ~
四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养$ F* R4 m, ~8 E% \5 d/ d
第四节腺上皮细胞的体外培养
% I/ o# @; G; x: j* ]/ x! [8 [# G一、唾液腺上皮细胞的培养
- x/ v! d/ H% e# \二、乳腺上皮细胞的培养
0 [% O& G5 P+ j- o( o(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持
; I# z7 H3 w, p# }$ Y _(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养
+ @6 R5 c# k, C2 U/ s3 y+ V4 @(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养. m, c; h; T1 ^
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法
+ T( M6 S( q; l(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
. n5 _, n" Y: @* B7 X( P第五节表皮细胞的体外培养( x) }, d* }1 H A7 F2 |
一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法9 \' K# }. y8 y$ Z8 _
二、角质形成细胞的复合培养法
8 P; Q- }* `$ k# |! ~" M F(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞3 z3 C! U7 Q) v. ]
(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞
5 s' f% F! B) ^* R三、表皮黑(色)素细胞的培养- x5 Z/ s) |. z/ _# U7 Z
四、表皮郎格汉斯细胞的培养
. O3 x1 n( s' {4 P第六节血管内皮细胞的体外培养
$ D# ^/ z' z q3 u1 A# i一、猪主动脉内皮细胞的培养
H$ d) X. o5 s) i5 M二、免主动脉内皮细胞的体外培养
! C6 b! F7 Y$ C4 V- E$ A8 ~! f三、人脐静脉内皮细胞的培养
% `* V" J+ j C# q$ k( K6 [- B四、大鼠主动脉内皮细胞的培养3 {" u k$ b, L, f
五、滤膜培养法培养血管内皮细胞
3 y4 W) m4 B( o* F7 Y; e六、免脑微血管内皮细胞培养
" s |2 f1 U( X" p# _, l七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养
) t% g6 B7 R n4 [第七节胸腺上皮细胞的体外培养& w0 }) Y$ y( u6 l% z% @ j* w
第九章结缔组织的体外培养8 m6 E& [7 R, M" {
第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术, N2 c. ]- ~6 q$ l$ V8 f8 d
一、结缔组织细胞的生长生物学特点
: [) X: ^% b& o$ q# e6 D, p二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术# h$ [0 n9 _+ o. h" z+ e
第二节结缔组织细胞培养各论
* v+ E8 V* \1 l$ K( |* b, N一、成纤维细胞的体外培养
" _( s; b* L" Z(一)真皮成纤维细胞的体外培养
! k `/ C$ X8 R' H/ i$ J(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养7 g6 `' O: i* y( n" j% z. I
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养* b& {, k4 p0 @: Y- p& F
(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养
$ }" c5 t5 K6 t1 ]& L9 t. g8 W(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养% a) e2 s- Z4 u! A+ j4 `& ^
(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养4 F& M1 c. x9 |" x$ d
(七)眼组织成纤维细胞的体外培养* ~0 {4 C! K9 n& f8 [
二、巨噬细胞的体外培养4 b4 X, [4 z' L& ?4 Z9 o
(一)获取肺泡巨噬细胞的方法 E1 c" p7 Z7 I5 e6 B1 Q
(二)获取腹腔巨噬细胞的方法* a. S" J) [* M4 W, T7 E
(三)巨噬细胞的纯化/ `& l$ x U$ t* _
(四)巨噬细胞的接种和培养
5 Q' t: m, {1 Y0 ~( J0 q3 b; O, c* B6 w三、脂肪细胞的体外培养8 f' P" ~3 }1 N6 L+ d- N
(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养
% Z! X# G) |! G( i6 L2 `* v(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养
+ }" c r1 H7 H/ m四、肥大细胞的体外培养
. B, A0 Q* \ J3 M m' ~(一)肺肥大细胞的体外培养
! Q( q V$ W9 S7 [9 X' ?9 C(二)肠肥大细胞的体外培养. p# E% ]+ w; l5 ?: @; k
(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养( K) F8 S6 x' C8 D; {
五、间充质干细胞的体外培养/ I0 ?' t( j; x- `
(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养 }; c5 V1 C J3 f$ ?8 L# B0 u8 Q
(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养/ R. m5 ^0 q! _8 z- K
(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养- s3 M+ Y! T/ k
(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养
& T% n$ w+ x; ]. b第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养
2 @2 k" ?2 U2 t- e' ~, ?; Y第一节眼组织细胞的体外培养+ j0 T! z, k/ q8 n
一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养2 j; v. w& k7 E: N
(一)角膜上皮细胞的培养( J: `2 o5 W* y8 f; Z! Q
(二)角膜内皮细胞的培养5 f& T$ l- z/ o! I2 n
二、小梁细胞的体外培养* S; e4 p0 a& U U d
三、视网膜色素上皮细胞的体外培养# o8 g( m7 L# S' [# e
四、晶状体上皮细胞的体外培养; ^/ ]: d+ O/ _) O, i; u6 k$ S
五、视网膜米勒细胞的体外培养
' M6 C, _5 M6 \- R; Z! a第二节骨与软骨组织的体外培养
: f& ^0 F% T- Q' u( S/ s一、成骨细胞的培养
0 D7 h0 t Q/ X( i) c+ L( ^(一)骨内成骨细胞的培养2 R0 t4 z) E( s0 A
(二)骨膜内成骨细胞培养
/ W' A, q; J+ P H7 N* W二、破骨细胞的培养
2 P& B" H+ e. J(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法: ?+ e1 g, c2 i4 L+ x! i/ a
(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法' Y! ^9 ^7 c& j1 L/ a
三、滑膜细胞的培养- Y+ X# P4 [# |) U, W U3 {3 X# F
(一)滑膜植块培养法4 p& V# a& ~8 {6 H! e
(二)分离的滑膜细胞培养法
' g2 q3 {( m* `& s8 n( p6 b* S四、软骨细胞的培养
. M. `+ t9 o. d9 A(一)关节软骨细胞的短期培养3 Z; @" _1 V. r: h% V5 i) k; x. p
(二)人关节软骨细胞的长期培养法
4 K" t( w I) u# w第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养8 Z* `$ g6 H# I
一、生精细胞的体外培养
! [& v& S- {. A- y二、睾丸支持细胞的培养6 x; {! X4 F: ^0 k* t3 Y2 E
三、睾丸间质细胞的培养
& \, {4 h6 D7 W5 c/ l% _6 V/ g四、肾小管上皮细胞的培养
4 E; m% v( h: Q% `- O五、肾小球系膜细胞的培养
4 o# A. n( h. L' N4 H1 q/ K第四节几种内分泌细胞的体外培养
, V" U. o! B: l& C! z# W$ L, K) d# O一、胰岛细胞的体外培养
* y7 O. T5 X, X3 S, d. I: z$ {二、人垂体腺瘤细胞培养, B- T0 k9 A6 m
三、甲状腺细胞的体外培养
' a" v" [! K6 ^* @4 d5 ^第五节羊水细胞的体外培养
0 `4 z% n+ T7 z, N一、羊水细胞的体外培养基本方法7 |& N6 v* W1 G$ k8 |* v) Y# Z
二、羊水细胞的富集培养法1 q9 s+ ?# D. h
第六节胚胎干细胞的体外培养
$ W0 t3 x- d' ~4 b9 Z" _一、体外培养胚胎干细胞的技术原理* u6 v$ l# x* f5 U
二、体外培养胚胎干细胞的基本过程4 t% Z( `+ |1 P( x" ]( k
(一)饲养层细胞的培养/ C0 u& N% R+ x* l( k: ?, o4 ?2 q
(二)饲养单层的制备
5 |* f( S5 r6 J P0 ?% D(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备
7 p+ J. V f0 E: Q3 H- `(四)胚胎干细胞的分离与培养! M* _5 k: @' e
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏
' W) A3 s: t. i9 s& C; |- j% {- Q/ t三、胚胎干细胞的鉴定
2 L$ N" N4 L; ?1 e: l3 R. Z2 A(一)碱性磷酸酶检测
# N* g, M7 U! b0 M @7 v(二)核型的鉴定( ~% P; R3 f7 v& R; f
(三)体外分化能力观察* z7 b8 N- N `7 T- X; o$ R8 I
(四)体内分化能力的观察
$ \5 x, _8 [6 r" F(五)嵌合能力的测定5 {% C, t4 D* _, g
第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养
' @! K& E6 W. Q \! U第一节概论0 R- O- |* N) E! @
一、造血干细胞的生物学特征
' f/ ~$ ]' b& n% c- V; Z(一)造血干细胞的基本特性
h, T3 I: r5 W5 k: H(二)对造血干细胞的识别/ N/ d" F: P. s" d
(三)造血干细胞的胞龄结构5 j% h1 V: r9 w0 h d
(四)造血干细胞的动力学1 |' q) K4 _9 C) O
二、造血祖细胞
1 {) v7 R7 o3 W, D- T5 Q第二节造血干细胞的测定技术9 {# L( P) {# V
一、CFUS的检测技术
' F0 M/ Q8 T" U9 W5 k二、以标记染色体测定脾结节的形成
" B7 ~! H+ o) I& t" T. {1 F三、脾结节移植法测定脾结节CFUS( p2 R+ H/ I3 ]& Y
第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
3 F* q0 Y2 R' t一、培养用液# j) G. F( G' M) \ d6 o0 K
二、特异性刺激因子的制备$ F' R$ o& n: [% p
(一)横纹肌条件培养液的制备
" f+ G% g8 [' {(二)白细胞条件培养液
% x6 w2 ^- w. Y5 W(三)脾细胞条件培养液6 P0 I' O5 K4 A* |
(四)再障病人血清的制备
# W: n- V0 A9 G* v l2 m" m( v(五)胎肝细胞裂解液的制备
( T+ H! J0 N( _3 p7 i第四节造血祖细胞的体外富集与培养
6 f" R- R. v9 \7 v一、造血祖细胞的富集5 F/ y3 R7 G2 o# }* j8 N H
(一)单个核细胞的分离5 A; L2 B6 `- K- N6 ?4 W* i
(二)CD34+细胞及其分离方法9 ` b9 I3 F1 D# w# v* Y+ w8 v
(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法9 |4 d1 ]/ P: {
二、造血祖细胞的体外培养, T3 c; z: e4 Z* c
三、各类造血祖细胞的培养技术+ s5 f( `( V/ W! |4 d
(一)CFUGM的培养* t% A+ M0 V$ m$ P- d. c2 S3 W
(二)红系造血祖细胞的培养& `+ X; W: O6 R% A' I" X; n9 b: z
(三)巨核造血祖细胞的培养. D/ E% D3 {8 t0 n# E- V
(四)混合细胞集落的培养# k. R8 B7 O7 s# J9 z t
(五)白血病细胞的培养" w; B8 R$ A# `; l4 _& I
(六)无血细胞体内扩散匣培养技术
3 W8 ?, h2 X5 |1 {第五节造血祖细胞培养技术的实际应用& o: U) W! V* I& ]5 l" j4 j, m
一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定
' B @: L( F4 L4 i1 U8 t! v% K二、某些血液疾病的细胞病理学$ }5 Z; a0 l9 V W7 v5 k' x
三、药物对造血细胞的作用研究 f5 Y# L6 T% ]* r4 p" T/ p0 u
四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗- c D' I: H6 J/ M% F% _/ n9 f
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
" Q; y: {# c7 w第十二章血淋巴细胞的体外培养; m5 i% M0 z$ j V* ~
第一节各类淋巴细胞的主要特征3 E0 D# d% Q9 i! Z) X
一、T淋巴细胞
! p' D: c1 d: a: M6 w' a( ?(一)T细胞的表面标志
& {( u9 Q: O3 [" Y# M7 `(二)T细胞亚群及其功能7 K1 K- L$ n' S1 J1 N+ Z& v8 M3 Y
二、B淋巴细胞
! I8 c5 e( k% T+ b% c4 D(一)B细胞的表面标志
# Y! W- {6 o* N(二)B细胞的亚群4 `" i0 a) L4 |% o
三、大颗粒淋巴细胞
! O" Q3 q0 e% W+ h/ d(一)NK细胞1 m+ R( T5 ] C+ Q9 a4 o
(二)K细胞 I0 H3 p: s2 s! O* T5 Y0 O0 h
第二节血淋巴细胞的分离
4 G1 G, J2 h3 b1 P" m一、单个核细胞的分离
4 b* Y. a5 _- i二、纯淋巴细胞的制备5 O3 p5 \' ~) W7 U- e3 H! X
(一)玻璃黏附法. `9 ^2 ?5 B6 N1 ~/ {: \
(二)羰基铁粉法7 \( v4 g7 _5 t
三、T细胞和B细胞的分离
6 w$ b0 s. m: S; ?* T(一)T细胞花环沉降法 x- i+ K5 M' n; m/ q
(二)尼龙毛柱分离法
5 _4 a: Q9 x4 r+ J: h# F四、大颗粒淋巴细胞的分离4 C! q3 W* V5 b% w, ], ~1 x
五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群
( R6 [! ^( f( ]0 |! {% d! e+ j六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群
. q$ ^8 p1 s) J5 J+ A第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用
" e5 D6 U' @* V: Q一、淋巴细胞转化试验) T% w' J) X/ O h# l- A. |6 H5 P
二、B细胞产生免疫球蛋白的检查
% y2 B/ t$ {( J2 j三、T细胞介导的细胞毒试验
9 g- ^3 d5 n3 A" ]8 v) A四、NK细胞毒性试验0 w* @2 C5 K9 v8 Q- p
五、K细胞毒性试验6 b- _6 V( ?% T5 n# \/ f
六、LAK细胞的制备
6 n4 i3 ^5 v- }; H七、淋巴细胞的体外长期培养$ Z3 w7 T2 c. ?/ b; r$ c2 W) G
(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆& w0 W3 a: H4 e
(二)用EB病毒转化B淋巴细胞
9 O5 M9 Q) J5 F6 M) `( z(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株$ D) W! z7 {4 ]: q9 J) k8 _
第十三章肌肉组织的体外培养
) k; E1 q1 p; l. y/ F. y$ |' E第一节肌肉组织体外培养技术概论
& i* M$ w' d4 ~8 _一、肌肉组织体外培养技术的发展简史4 {5 \ D7 k+ ~1 [
二、肌肉组织细胞培养的意义与评价
& N+ _' U0 `0 Z. s( X0 h' |6 l第二节心肌细胞的体外培养9 P, G* B# m/ N/ i& T; U1 c# h
一、心肌细胞培养的基本原理
! r- E9 @# t l, }/ B二、心肌细胞培养用液
0 l+ F( f9 F4 S, K$ W(一)常用平衡盐溶液/ b2 G, D4 \6 [2 Y
(二)心肌细胞培养液& H: V7 t# }! u2 E$ S2 z& D
(三)其它培养用液
1 t5 O9 T! J: m1 u! h- Y# k) c三、心肌细胞的培养方法& r3 p Z7 B! q W- @4 I
(一)心肌细胞的原代培养
" F8 E# l3 i' I$ K9 B: s J, Z( F(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备6 J8 m U" n3 b) t! Q4 F
(三)心肌细胞培养方法的某些发展
, X) A4 e; X* u+ u( c四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法
9 E9 @! `: `- t(一)一般观察% N8 K. a$ K/ [9 p8 t2 q
(二)培养心肌细胞的形态学观察' J1 ]( S8 _6 m3 L; e2 x
(三)心肌细胞搏动的观察
% a0 h) m! A, S6 G) b' Y五、培养心肌细胞的某些电生理特性3 R6 a' T, V P& c+ ^; l
六、培养心肌细胞代谢的某些特点
; P+ L1 {! i8 X' l第三节平滑肌细胞的体外培养6 n. D, g; J8 e1 p) O7 r0 F
一、平滑肌细胞体外培养方法* a" o' `, z: n* g0 M
二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定& K3 \: s( R+ R
三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素. J+ ^9 m8 P4 E" j0 \0 t
第四节骨骼肌细胞的体外培养; c6 p% M1 v3 O0 J+ n2 Z
一、骨骼肌细胞培养所需主要材料
, a; ]: B* ^: ]. W+ F1 L. z" P二、骨骼肌细胞培养方法
0 a" Y/ G; A- i" y(一)乌类骨骼肌细胞的培养
1 Q1 F& Z% N3 d- d% m- l x(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法
; S6 E% Q& I, B% o(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法; f, H6 P$ t+ m4 h6 B7 ~1 \# z- H
三、肌源性细胞系的建立, J4 ~2 ^6 W. y/ V! D: a
第十四章神经组织的体外培养. q1 E" S& F8 ?
第一节神经元的体外培养8 _& G' S# v" f* R4 z& d8 r
一、神经组织的植块培养法
, h' x3 \, [6 @: ^0 S, _(一)概述
, \5 [1 r6 V; |) w(二)灰质组织或神经节的体外培养
3 A" d9 m5 b5 _( V4 O(三)白质植块的培养
/ j1 _, c% }4 Z* O5 J% y) F {: D* w二、神经元的分离细胞培养方法
2 N; p4 x8 y, A( Q+ A9 m' s(一)材料的来源* [, a4 G, F3 `) X7 X9 {
(二)神经元体外培养液
$ E ^5 B$ x4 \0 A(三)神经元体外培养的生长基质
# B8 b9 r6 }# ]* G3 P" a" T F4 j3 T(四)神经元的分离细胞培养过程
- C$ l5 }( w' _; e$ C0 v(五)神经元细胞的体外培养
. `2 W* F4 G' E5 {% D6 }5 B) v第二节神经胶质细胞的体外培养
( f! H+ v" h, Q! v0 ^一、星形胶质细胞的体外培养
2 O3 s1 h+ W8 S$ {+ }; t7 R; ?(一)取材的动物年龄与部位
, N+ i; w I0 V0 `% \% h(二)星形胶质细胞的体外培养方法
" n, M+ i. F& a$ ~) N% [(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液3 Q9 p& {0 c# O
(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物% L( p" t2 {2 z3 y) M( _0 k+ e7 ]
二、少突胶质细胞的体外培养
0 z3 @0 K2 Z0 ^' z4 r. w A(一)体外纯化过程# `( b1 ?! _% k+ E5 y( r K7 E
(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基
" ^$ l+ ^- d, \7 R9 ]: u, X(三)少突胶质细胞的化学标志物
' {2 i: }, w4 j( _& a- X(四)少突胶质细胞的形态学特征
; M) V9 t3 ]: m1 m" w& F- p1 R% S# I三、施旺细胞的体外培养) [" ~+ @% n6 |, h3 G- {
(一)施旺细胞的体外培养方法
) d1 ^5 |/ c1 D, I(二)施旺细胞的无血清限定性培养基
% e% k t4 S9 h9 ~3 d(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物
6 a6 V' y- Z! @3 A3 ]四、小胶质细胞的体外培养
2 N) t' o0 Y, [9 W, j$ ~8 S. E(一)小胶质细胞的体外培养方法
+ a' S+ k- l* y( d- A3 M(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定( I- L7 a% S' P W; s, M5 W P9 w
五、其它神经胶质细胞的体外培养 z5 K0 E! A: d- M' O
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较
/ X. X$ F& m5 X/ F, Q第三节各类神经组织细胞的培养方法) E" r) J3 w! B. n% E" A
一、鸡胚背根节的体外培养1 s1 b: Q* S8 p: o+ m: G: C
二、大鼠颈上神经节的体外培养5 N" ?4 a4 j) y6 Y9 D
三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养2 H9 l' h( @, I
四、大鼠星形胶质细胞的体外培养' a9 o& a7 t" ?
(一)方法一：植块培养法
2 h, R9 O3 r; w(二)方法一：分离细胞培养法
, r4 i. r' c# Z+ @; h$ q五、大鼠少突胶质细胞的体外培养
{% r* t, J. i(一)方法一：植块培养法% E- H3 G+ V& }, L: v& k
(二)方法二：密度梯度离心法
' j: {3 `+ i9 {* C! |" g(三)方法三：恒温摇床处理法
7 k1 z% [ r( }- o6 a* E. y$ D) }% `六、大鼠施旺细胞的体外培养
3 h8 x. ^7 e$ K(一)方法一：常规分离细胞培养法
5 u) c4 k& `9 M0 ~3 N(二)方法二：免疫选择法. _( z5 l1 _* ]+ H# v% g
(三)方法三：反复植块法
& Y# T* F5 }" r1 _* n七、鼠脑小胶质细胞的体外培养, [$ G' v* i) k" f* w
八、脊髓神经元的体外培养" M' ~% H; O& F
(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法
' I7 p" x% ]' s' P* {) J(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法
( @3 Z% V) E: ]" ~/ n9 _: z九、鼠脑神经干细胞的体外培养9 O5 k( N6 ~$ h$ @/ w
(一)胚胎神经干细胞的体外培养9 |; }2 n2 I4 P; z
(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养( k$ U4 b+ S6 d0 Z# j! c
十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材
: i/ @- H6 ]0 B4 W6 W$ {% [3 x第三部分特殊类动物细胞的体外培养
) ~% @* R, X/ G. {: u9 N第十五章肿瘤细胞的体外培养% ~2 F8 n, g; w: P1 f) t
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论0 ~/ g1 T7 u) Y+ l' ~ W" d
一、肿瘤细胞在体内生长的特征# ~5 ]* w) t% d& Z, O! S
二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性
* m9 c+ Y* j- W, Y* m3 Y# n9 \6 o三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别+ f, s( y% a6 N# ?9 c
四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
! l1 d% j' y- n, W9 h) m# ?6 i* l第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术& ^6 j4 {+ m+ s" u: {
一、肿瘤组织细胞的原代培养
# B" E1 v4 Q; Q! P) d二、肿瘤细胞的传代
* g8 e. f! s1 J( x3 p# D- |6 a: w三、肿瘤细胞的克隆培养法
3 G! k) F- Q7 `( [' L# j第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征
' |6 h/ Y F+ b一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征9 w# g1 U3 w+ a+ h6 ^6 J
二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性# B3 h3 w7 j- e. N; u" X; ]$ x
(一)染色体数目及核型
. s! |1 @7 B2 v3 k# r1 _5 I& p: `(二)永生性1 `& T; Y/ n/ W! A. O; a
(三)异质性
& j# s! I2 ^5 x(四)动物接种成瘤性
, A5 z# @9 c9 u4 O7 ] O3 b! ^(五)非锚着生长依赖性( s4 V; ?& p) t6 ^7 `8 I1 |
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍2 V% l+ i/ _1 I$ i
一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍7 c( ]. p: \* z" v9 ?8 c. q2 y
二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系 N0 b8 }' w+ A7 ^& p
第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程. o& \& x8 J: e4 p# I
一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立5 A8 ~+ B! }% l# o2 K0 [+ O
二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
3 [8 j* c6 A7 O3 I! P! T, X1 k; C三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养, S7 ^" w* B n* _
四、人神经母细胞瘤细胞系的建立! B4 N! K6 F) |* X' v6 V- j, ?* |
五、人肺腺癌细胞系的建立
7 p. s( {: c+ B5 z六、有肺巨细胞癌细胞系的建立
1 J. g# b; g/ H; _3 f, v' B* @% k七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
' O8 |# I: q8 E/ |3 W八、人卵巢癌细胞系的建立
0 _: ^2 q* N$ P- i8 f% |- ?九、人肝癌细胞系的建立# B0 N2 U: b2 Q, j
十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立; ~, q$ d4 H! |0 |1 y
十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
. x1 F- T: S/ {# X十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立/ H5 @( E' Q# C! A5 e
第六节肿瘤细胞培养的应用
9 s4 l, c X, g) ~8 O' F3 q7 b0 t一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究 R3 {/ v5 l2 i& G
二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究: D$ U' i1 ~ X' p+ b
三、培养肿瘤细胞的体外分化实验 n7 E m% ?) X
四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究
- w( c* R6 U& V4 W* l第十六章病原微生物的培养2 a3 o8 C3 { U6 b9 `0 X o6 t/ `) F
第一节病原微生物培养技术概论
) H& [! c2 S0 W1 B) f一、病原微生物培养的基本原理* ~5 u1 m/ c% q/ \9 L j
二、病原微生物培养的基本方法和技术
* a; M6 j, z* c. Z& h2 J2 ?三、病原微生物培养的应用
4 o2 w/ l7 M3 Z1 f5 e l% P0 s第二节细菌的培养
5 D1 s# V1 }! S) z一、细菌培养的基本条件0 b5 H; w) [/ P; u# W
(一)细菌培养基
: g x% G( G2 w. X: W- ]7 Y(二)细菌生长的其它条件; G: r+ q* r! A8 D. X3 v
二、细菌生长繁殖的特点
; j2 ]" ~# H% T9 G: F% }5 h三、细菌培养的基本技术; y' @/ q# Z1 t
(一)无菌操作技术0 n6 B+ |9 i; q, E6 b: C0 Z: I* ^
(二)细菌接种技术+ P2 p. J% H3 J @/ C5 t
四、细菌培养的方法
+ }5 d. j. }. k" P5 g9 j! e(一)一般培养法
) @7 B/ T; A& C(二)二氧化碳培养法$ Z; W) G( u6 g( Y
(三)厌氧培养法7 f' F1 c, _4 {6 e1 t4 V: M
五、各别类细菌的培养. j; s+ \( d! D, R$ C( {
(一)致病性葡萄球菌的培养, a+ A& \+ E3 N+ D: e3 O. ~
(二)幽门螺旋杆菌的培养
0 p; c0 D0 `' O- n(三)结核杆菌的培养
5 D x! m! f5 Y! r9 s(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养% m5 q% p9 F! ^0 f
第三节其它类菌的培养
; y6 a F" G# s" U# X0 T一、放线菌的培养
: x& l- b# a7 G! k# `9 e& M(一)放线菌培养的一般条件 ]0 i. o9 V( U. N$ W
(二)放线菌培养基
$ r% }, ^' K8 }; d# y. B二、真菌的培养. }( E- J+ O0 U/ I
(一)真菌培养的一般条件
x9 r: ^9 P7 U( e5 k(二)常见致病真菌的培养基7 ?- [8 H: P/ h1 |5 u
三、支原体培养
1 w3 h5 ?4 l* B& I(一)支原体培养的一般条件$ ?) s: n$ Q9 h
(二)常见病原支原体的培养基
6 k7 r& U0 C6 K/ q6 [; m四、立克次体的培养+ R( p5 G- `! c9 g- Y
(一)立克次体培养的一般条件8 t& a! A5 f: c {7 Q- e5 L3 p
(二)常见病原立克次体的培养
1 b+ A' z' o0 p五、衣原体培养, {% \! l5 N1 y6 x2 b3 A
(一)衣原体培养的一般条件
1 G4 p/ `5 m7 p* G3 f2 ~(二)常见的病原性衣原体的培养
; @$ e+ Y, |! m, ]' p" o六、螺旋体的培养! X6 G7 Q& ?# k- @# k
(一)螺旋体培养的一般条件0 J) V0 w5 q/ S5 _6 a: h
(二)钩端螺旋体培养基% c0 j7 w. L0 O5 k
(三)常见病原螺旋体的培养
$ v0 Y& a' D& V) Q; u. }5 Q第四节病毒的培养0 u6 l. @/ N/ X1 ]+ j; m4 A
一、宿主细胞培养法
# U. x* O) e! i" ]; h6 }/ v6 k& a二、鸡胚培养法8 b9 i# Y1 I8 u
三、各别类宿主细胞培养法
5 [3 H9 H: @7 i9 {/ `% f( E" u(一)EB病毒的培养
0 F* `' b' E+ ~7 R' e(二)脊髓灰质炎病毒的培养1 y# H' p8 E+ G
(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用
+ A2 d r8 y) @" a1 Q1 \( X9 d6 @第十七章医学寄生虫的体外培养4 Z. k7 E3 Y& U- }! F
第一节寄生虫的体外培养技术概论2 _+ G) V2 h1 c5 @5 G* M; L' g
一、寄生虫的营养与代谢特点
* L, M8 R Q' r. n7 |二、寄生虫的体外培养技术类别( ~6 N7 F: D# p7 f H# L
(一)寄生虫虫体培养& W: \/ i& d8 Y' Q) ?
(二)寄生虫细胞培养' e9 i v# z* U. p7 T
(三)寄生虫的体外培养常用培养基
- U) }! p" H: v- Z三、寄生虫体外培养技术的应用
; ]) k N. G2 n) z(一)在生物学研究中的应用
7 E! T5 T/ a: e(二)在病理与免疫学研究中的应用
3 Q1 X7 z0 {. c" }! o(三)在药物学研究中的应用) R; o# ]: q' j& N# Q9 ^
第二节疟原虫体外培养
! f6 `+ ], b2 y. H$ @一、疟原虫红外期体外培养
: B7 `0 h0 G4 @(一)约氏疟原虫红外期的体外培养
' H: c* l* @( j5 Q1 P& b5 F! A* v- R(二)人疟原虫红细胞外期体外培养
1 `& m0 c1 e) H. B% z7 M3 y二、疟原虫红内期体外培养* K' h7 g0 t: _; d
(一)体外长期连续培养4 h c2 R: W0 Q% b! t( ?
(二)同步培养法, y' H, ?; z* X/ M5 a* V" ~
(三)疟原虫冷冻保存技术
' v2 _4 D2 W" v7 E- W三、恶性疟原虫配子体的体外培养
0 i1 O/ N2 p+ U& I- n9 i* w; u第三节机会性致病原虫的体外培养1 E& Z- k. J5 U* f/ e
一、弓形虫的体外培养0 p5 ?' Q! v& A" W
(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法* ^/ {6 T9 ^4 p& N8 y- D
(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法
- b* |5 x% Q; E, c3 I+ c(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法
6 k- F( \0 L6 v7 {- G(四)包囊的培养* h. o) O: \8 A
(五)弓形虫的冷冻保存技术* p; r9 \7 Z% v
二、卡氏肺孢子虫体外培养) W. a. _2 x2 O% z. v
(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫9 F) d9 m9 [# A8 ]0 h0 Q" q
(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫
4 S f5 P3 b) v6 `三、隐孢子虫体外培养
7 r. L2 f3 C0 r4 f; Q(一)在组织细胞内培养" i1 X) E2 E1 d$ x/ c8 a
(二)在鸡胚中培养
0 ~" j- {2 y" Y) \( h第四节日本血吸虫体外培养
# R' a0 ?, | ]( W( m" }8 g) ^% q一、培养基及培养条件5 |$ k: Q6 R0 S( t+ G; f- D
(一)培养基的种类
4 _; J6 l7 Y, Y, z" k(二)培养条件6 M' e3 |- H" W0 d( ?6 I
二、各期培养方法; l& _% [5 x: x1 O& M
(一)尾蚴人工转变童虫体外培养1 J5 {, J( z8 e9 \0 }
(二)肺期童虫体外培养
/ f# h" u' A; t8 [1 ?6 ]0 G(三)成虫体外培养% C* d6 o. g' }* b8 g
(四)虫卵的体外培养. O5 G' I4 e" J3 H7 b- w
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养
2 a' g$ _2 `2 [8 K0 t, F(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养" M% Y8 ?9 s N, e$ f! f
(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养
# }2 o% t1 r: [: q第五节棘球绦虫体外培养
% `9 r: g# j# M Q6 ^一、细粒棘球绦虫的体外培养
2 g9 N Z: D% \(一)囊型发育- `( l: o! O7 o" |8 f# D
(二)链体发育3 G) N9 W: B& h$ n" H$ z) r
(三)成虫体外培养% m& u; ~7 ~; |
(四)细胞培养1 B9 v6 z# X+ f) K* h, \
二、多房棘球绦虫体外培养
1 g0 T3 Q% i# @5 [, |(一)多房棘球绦虫虫体培养
Z/ f, j0 a- u4 m4 a- ?; k+ E4 N(二)多房棘球绦虫细胞培养
; Q$ T% i% R, b4 s第十八章无脊椎动物组织的体外培养
& B0 D. P0 p `( F4 f第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术$ O* O$ W4 W8 m6 b8 }6 t' f- F
一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件9 E. N& B: V8 b$ n; J
(一)无脊椎动物细胞培养基
( v* ]7 W" ^/ }, ?9 m& Y(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方
+ E2 t& m4 I' W' f" K(三)昆虫组织培养基的配制2 O( x8 t6 F* h5 {+ m. u! B& U
(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件1 ?. G N; C6 u, S" v" ^
二、无脊椎动物细胞的原代培养! I- q- P- d5 a$ E6 ^' ~- c
三、无脊椎动物细胞的传代培养
1 a. }' F) \& j, ^4 }" ^* q四、无脊椎动物细胞的悬浮培养: M" G+ ~9 L0 T- m; a& K( Y
五、培养细胞的低温保存和冷冻保存3 E0 M8 J; N. Z* @
第二节无脊椎动物的器官培养" q( ?1 _6 B2 E( d: M
一、软体动物器官的体外培养
- ]- P* k" v3 n+ G. R. y二、蠊翅目昆虫的体外器官培养/ k0 J5 @9 X# a7 n
第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立! m: I4 y, s3 i/ s+ N# A0 I
一、昆虫细胞系的建立% b2 K( `' R6 X, \2 n* g0 g
(一)鳞翅目
" K5 j; k* q I: `0 W& u(二)双翅目 [1 W! V% I/ `+ k
(三)蠊翅目
% n5 D' O) W% ~7 \) O6 l* H8 g2 W" K二、昆虫缺陷型细胞株的建立
" D4 _& l! C# Z; X _' l" e三、软体动物细胞系的建立
7 s. P7 y3 p8 H& S3 m; k(一)蜗牛细胞系的建立
' U6 z- R! h# P9 L1 G% c' T(二)牡蛎细胞的离体培养1 S; D* E) M) D' s
四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立
$ V. {0 r6 B- ~5 A5 T, J7 x/ K( S% a五、建立细胞系的注意事项
% A) i' [( ]* L8 c T, f2 a* z第四节无脊椎动物细胞的大规模培养
1 m2 j1 {' e9 W" o; v2 i一、大规模悬浮细胞培养的添加剂( J* _4 x" v8 t
二、低剪切力连续生物反应器3 c: o; b/ a. i4 R. k+ Q m2 ^
三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
5 q+ d: ^ [" L: B. B! L(一)扩大规模培养的主要材料9 s. y; a( f- ~8 [% F k' m
(二)扩大规模培养方法7 {! \! w7 {; V
四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术3 W1 q. q3 ]: O, Z4 f9 n- ~/ y
第四部分体外培养技术的应用
$ b; g7 B; y! R8 a: S& F第十九章体外培养的应用技术6 h$ b! d9 ]9 |% k) @% |) I
第一节细胞分化与体外诱导分化
4 }0 [0 x% p( {5 D- r一、正常细胞分化' w/ Z+ G" G0 k# k
二、EC、ES和EG细胞系
9 h- @1 G. Z+ W, `6 ^ K三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术# d* k7 w/ H- T4 M: L- L4 ^4 _9 j
(一)饲养层细胞
. L5 { {$ _# n9 t! U(二)胚胎细胞来源 Y4 }$ w& a& ]7 ]% ]* l; |/ [
(三)ES和EG细胞的培养过程" _0 \+ `6 _# U6 y/ o7 M
(四)ES和EG细胞系特性和鉴定
6 ?) j2 P7 u- D, A四、ES细胞体外诱导分化+ P, u y [' c- _, i
(一)ES细胞体外诱导分化的意义0 {4 r" R0 q, Q
(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理8 X! P8 C+ h, H$ e. H }6 m
(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法
7 J t- K7 p# `(四)ES细胞体外分化的细胞类型! R, ?& i5 N( z& q8 r
五、诱导分化细胞的永生化
/ u3 j1 r( ^& ~8 n( E6 U8 f第二节细胞融合技术
& h* S3 N6 Z8 F) J3 x) @% q一、病毒融合法& M5 j5 O% ~; n* p2 b
二、聚乙二醇诱导细胞融合法; o Z( }1 c- P! W" |; Y
三、电诱导细胞融合法( k0 x, c7 L% y/ E
第三节体外受精技术- V) G8 S- {4 y9 j# B6 M9 ~$ ?2 M
一、体外受精的基本实验条件
6 U" W( ~" ^5 I3 d! \(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品5 n- W1 I) B7 P
(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理8 R0 l* h" o1 |- n1 A9 _$ j" c
(三)胚胎培养液$ O+ e7 p8 A' \# j( e# g
二、胚胎的体外培养
+ |+ R9 }2 v9 M$ B/ i+ I& \; P(一)卵母细胞的收集
8 Z% l6 m0 b V: K7 o. u; E: a(二)精子的体外获能
# H- D( b, K; i1 `7 N* `, X(三)体外受精: ]' w1 I7 w# [
(四)卵裂观察及胚胎评分
; D- M M$ U5 p4 j4 o+ p7 I三、胚胎移植3 C# J. o- Q. u9 r! ^- ?$ }
第四节基因转染技术与体外细胞转化
7 R5 b. p' g* x" j1 x d1 F一、基因转染技术2 w, K2 r7 O4 q1 | P
(一)待转染细胞的准备
" P( ?& o4 m! s$ [9 D(二)质粒DNA的纯化
$ N. s7 K N9 {' l; r% f(三)基因转染的方法
2 \+ f) m0 w! g$ d5 n# M; i(四)转染细胞的筛选& |0 ?6 D. s! G0 }- @# W2 [4 v
二、体外细胞转化
; E' e" V+ i% m- ^/ B- ]) R(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程
1 g( @9 A: Y$ f! V(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序
- y9 F& S9 Z. e' ?* x! c. x三、转基因动物2 q2 @* }" {; c! y
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术3 T' w7 ^, G/ k; u
一、杂交瘤技术
. [# s) m8 g+ z(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程
: f, [6 c2 Y4 K9 w7 E# c9 P(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
" B% Q3 h9 m1 h$ X$ q9 m. ?# A(三)杂交瘤细胞的染色体分析
4 }+ ]& B, R+ u- t& H二、单克隆抗体/ p. x2 Q" z- n& v
(一)单克隆抗体的概念( e' B: |/ b; m+ @& ^' J
(二)单克隆抗体的鉴定
5 l2 }- y- o* ^(三)单克隆抗体的生产和提纯( ?7 N3 D! C( z& |& ?0 P- B
(四)单克隆抗体技术的发展
2 W8 k/ }: {. h) W8 d, p第二十章动物细胞大规模培养+ y, _1 c3 o' ~+ t
第一节动物细胞培养有关的特性7 \: P* Z' T2 S$ [
一、动物与微生物细胞的差别- C3 O3 H9 P3 h% u j* g8 Y
二、动物细胞生长特性
* V- u6 R1 E$ u$ k: J第二节发酵
3 J) F& r& S' B' f! e0 ?: O" _一、培养方法
/ R( |( J4 W/ z: G+ h9 b* O* L(一)贴壁培养% K3 J% ]% ]* A- T2 A* V
(二)悬浮培养
. x5 {. R( n# K" R$ P2 r(三)固定化培养
: a7 M3 {; R7 x; L h% D二、动物细胞培养的发酵工艺
! C" A' |) _! z! Y# n(一)分批式培养
# r. j7 S3 E ~* U+ m(二)流加式培养/ i! V) ]% [- P0 k0 P
(三)半连续式培养+ F7 N, C5 b( v
(四)连续式培养+ H2 _8 B3 _5 T( s) \
(五)灌注培养
! d) m7 z2 v% D, |7 {) |/ ~三、发酵工艺条件及其控制5 p" c, _* x/ U+ k
(一)培养基) C8 X6 G- t4 _/ v0 Z" k
(二)培养温度的调节控制
& c6 ~9 [9 [% z p( ~* s" m(三)培养液酸碱度的调节控制5 E2 @# l6 x9 R
(四)溶解氧的调节控制
5 \2 H2 W% U. ?$ d4 [ U* T四、动物细胞大规模培养用生物反应器+ i a. s4 w/ ]/ a
(一)搅拌罐生物反应器
! f) b. } M/ G: F* H2 ?(二)气升式生物反应器
* i$ ^ a+ L- z2 b+ s! f(三)鼓泡式生物反应器
$ N& i% l) d; S: C(四)中空纤维生物反应器
; ^; S ~* d: V第三节动物细胞微载体培养技术
; b1 P* U6 l8 r% M: \/ ^- S" ^; J一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制
% I% ~ W8 c1 Q( I二、微载体的主要特性) u1 o4 R6 a! U; f& Q
三、微载体的种类及其性质 p& f+ M( i$ V$ c
(一)交联葡聚糖为基质的微载体" O8 P; i i# K1 X" c
(二)塑料为基质的微载体
9 P6 v0 x+ w0 S$ z. }, U) h* V(三)明胶/变性胶原微载体- M. b( y0 q x+ L4 t
(四)玻璃为基质的微载体$ l' S) [9 U, Q0 A" ^1 Z! i
(五)纤维素为基质微载体$ z, \# q6 O! w# F# t
(六)液膜微载体7 D5 u/ `1 x4 Y
(七)大孔微载体6 A: a, V0 m7 O$ z; Q( l
四、微载体的选择, L: B- P' C! ~) m+ Q7 S
第四节动物细胞大规模培养技术的应用
4 ~$ r# L3 A! f. a一、在疫苗生产上的应用
$ ?$ x9 ` J& G, B二、在干扰素生产上的应用
8 x0 m, H5 W4 P3 V三、在单克隆抗体生产上的应用! B9 Q# {8 C: o6 I
四、在其它基因重组产品生产上的应用
" ^" f6 z# z X4 f; h7 O7 e T# O; N$ D第五部分植物组织细胞的培养
, k# U- c8 j! T) ~9 ?1 N第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术
* W6 d! `1 |, H/ K第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别' l1 u4 n4 ]! c) N/ T% M' s
一、植物组织细胞培养的基本概念# ~: A5 b+ j- u0 {
二、植物组织细胞培养技术的类别
6 d% l1 V0 z% P/ r& I第二节植物组织培养技术的发展简史
- O* x3 c; N# N, ^/ t一、植物组织细胞培养技术的创立阶段4 ^( V9 W! }) p8 `8 h5 L" \
二、植物组织细胞培养技术的发展阶段6 ?5 n/ R" E& m& w
三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段
/ M' y. g9 y& H7 k第三节植物组织细胞培养技术概述$ \& \6 c$ P' ?. x+ g1 h. A* { V
一、植物组织细胞培养的基本条件6 I3 g6 m4 U$ L0 m; q
(一)植物组织细胞培养的营养条件
6 l) ^8 q. R7 {% Q2 g9 Q(二)植物组织细胞培养的环境条件6 ?* R z2 f! ?1 }
二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
0 B9 K( e6 S* B: |(一)植物组织细胞培养的基本方法
. a: [6 }: o/ Q# }: w8 j(二)植物组织细胞培养的基本技术" X$ k0 j" m! Q, e- h& }
三、植物组织细胞培养的基本程序' t) m& {) W' v L9 X
四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式 ]" m8 b! [. v1 C5 {+ D" s
(一)直接芽分化的方式% p* u& p0 o [& @; U
(二)通过愈伤组织形成的方式& G4 F" G+ w3 R, K, w4 o8 U. M$ n8 I$ h
(三)胚状体形成的方式 [7 i* s7 E7 {0 d
五、植物组织细胞培养物的鉴定
% `6 s3 f+ C" s8 D# `(一)植物组织培养物的组织学观察
5 M5 ~( f* d& I O+ \! L( j$ }, k0 K4 f(二)植物组织培养物的染色体观察7 C1 U4 C+ `' Q; h; p9 G: N( B' U
六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同, u- Q* B; R$ W& h& [/ |
第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征
0 b' V5 v2 V6 Z* C% P一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性4 S1 W+ u$ \4 d- P; l' h
(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性
* D8 B( L5 H1 Y(二)植物组织细胞全能性实现的途径
4 `) c. Y( w7 F# C二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性* K+ [# J, g+ k. Y( u
(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性
/ N: }8 O( Z6 j" U0 J( l(二)离体培养的植物组织细胞变异机制: `9 p, V: \, `% _) G, [ }
三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象5 I5 X/ F& b" d7 M* w$ f9 _
(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在7 f% s0 O; v4 _
(二)体细胞类减数分裂发生的机制
! c, ~/ g6 h4 D, `; {5 ^4 Y第二十二章植物组织细胞培养各论7 I; H4 M- J" A
第一节植物的胚胎培养% t9 P1 j' i) ?+ r$ e# F
一、植物胚胎培养的概念( E* z2 T3 [" o/ g
二、植物的幼胚培养
. w2 T9 O' ]6 K; f- k# s: a(一)幼胚培养的基本过程8 U% ]3 L3 o- e# N
(二)植物幼胚培养的实例0 S7 V5 R% a- X6 U ?5 p* x
三、植物的成熟胚培养* \7 K8 j% V L/ ]! r7 E7 E
四、植物的胚珠培养 j/ U: X" A5 {* J* [3 @% p& Q
(一)胚珠培养的基本过程
$ k) y" ]0 K$ I& z2 a9 }. O- O3 N(二)胚珠培养的实例9 J' H1 M7 x, s; c+ ?
五、子房的培养6 |" N9 l7 w2 z9 O& N, y
(一)子房培养的基本过程
9 L R6 m# r5 m( e1 y(二)植物子房培养实例
- N) {& k- E6 D0 w* L六、植物的胚乳培养
2 f/ w6 d. U" L) R(一)胚乳培养的基本过程! ~4 I' h" \, t. G h- t0 g* s
(二)植物的胚乳培养实例) R \! r1 m. P: e. o( [4 B: P
第二节植物的器官培养- b: b: P2 H+ e: ]+ W) s6 o
一、植物器官培养的概念# u& X$ Y: ^5 L5 Z
二、离体根培养
4 k" X8 k T1 |" Y6 l(二)根培养的基本过程
7 v O' G' A- i& v(二)植物离体根的培养实例7 i+ a& k- n- n& b3 G! f
三、离体茎培养
( ^" j8 w2 A V' q! i+ m& h% G(一)离体茎培养的基本过程6 ?% i& A1 M3 f# I% ?
(二)植物茎尖培养的实例
8 Q& \) `# r5 C7 A& h四、离体叶培养
) _4 X8 j4 L0 a' T& V' A8 ](一)叶培养的基本过程: y5 n+ a a4 S+ |% M, u
(二)叶器官培养的实例) {& C# h" F; l/ r
五、植物花器官的培养
! D- H' b3 K' I3 K l: l. l6 O(一)花培养的基本过程
/ R, ^: |8 m; _8 s2 [, H! ^; J# q, A(二)花器官培养的实例: W! K/ R' _# Y; A( f
六、植物种子和果实培养& @& Q: P' b3 i! W9 G5 h" m& `
(一)种子和果实培养的基本过程
) a/ m4 c3 v' \(二)植物种子和果实培养的实例3 s* \0 e% }5 O" z( u. a7 \% x
第三节植物的组织培养
0 W g6 d6 X9 O6 Z/ [- ~一、植物的组织培养概念5 ?7 R& y: f# O) h$ B
二、植物愈伤组织的培养* f. O% {5 I6 K: d. d9 l0 o
三、植物胚性愈伤组织的培养, }' N6 E2 E$ _) S$ m
(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程
1 c/ B3 e3 C0 W(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例
, ~) |4 W; _9 L9 B) _第四节植物的细胞培养
* F4 @6 g/ B8 p5 o7 U8 C ]4 g一、植物细胞培养的概念. g, n! q" [/ q5 w5 S8 \
二、植物细胞悬浮培养
; K" o; p' {# p* k(一)植物细胞悬浮培养的基本过程
* j5 n, g4 B' s i! H(二)悬浮细胞的培养实例
5 q; u# q$ T7 e. E5 L9 p9 F) a三、植物的单细胞培养
; N x; Y$ @3 u7 }& K(一)植物单细胞培养的基本过程6 J5 g" G) _/ w- J$ m9 g
(二)植物单细胞培养实例
7 k) ]; m2 x, m/ H+ {8 u" j9 H X+ `第五节植物的花药与花粉培养3 z; |% y d" f" x# J
一、植物花药与花粉培养的概念
8 O1 J( k& T9 M二、植物的花药培养, g3 I4 G4 H" H7 I3 e# k( K( l
(一)花药培养的基本过程0 M0 d6 D9 v7 A8 C- e2 d
(二)植物花药培养实例9 \% }& B9 z( |% ?4 }" ~- d8 b
三、植物的花粉培养
- h' P% h d9 @# J/ g$ ?(一)花粉培养的基本过程
, a; {+ `7 @5 |, I2 r(二)植物花粉培养实例/ C: o. t6 H& P7 `$ b% i0 {& _
第六节植物的原生质体培养
" S6 M# f- @0 G0 }% I% W. O$ u8 A2 R一、原生质体培养的概念
4 \3 I% j& l6 Z) ]# I二、原生质体的培养
- h+ }5 b3 `) R" R! K$ v3 K(一)原生质体培养的基本过程8 `' S+ v: I7 r; v
(二)原生质体培养实例
* Y, r! q$ p1 ]- ?3 q+ l5 \第二十三章植物组织细胞培养的应用
. s+ l' x/ V- x6 M1 X第一节植物组织细胞培养的应用技术" C- {* q, x* b0 p% i9 l
一、植物基因转移技术8 @$ ^, \4 I+ g. m! N- ?
(一)植物基因的获取3 I& q: g7 ^: g
(二)植物基因的载体6 ?) F4 B# M+ {, j# l
(三)植物基因的转移方法9 V3 f# v* m/ V
(四)转基因植物的检测. X" `, [9 Z3 T5 j$ h
(五)植物基因转移实例
% i2 x5 Q# k3 f2 ]3 l. H" ^二、植物体细胞融合技术
; r" s/ M3 r. ~' t(一)原生质体融合的基本方法! f+ x6 @, F7 Y9 H
(二)原生质融合体的生长发育* B3 L6 d% g/ ]0 g- s% k
(三)原生质体融合实例
* e; U" K* z, i, C8 T三、植物体外受精技术2 S% l( k5 f0 _: K; |' S; e
四、快速繁殖植物技术
: G6 O% Z7 w& n: ^; K3 `. \第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
0 K& [' S2 j5 R/ p4 G4 N一、利用植物组织培养技术改良植物品质
8 J6 m2 H: y6 I$ v' x) D; K7 [(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种! B( j! J- F& Y2 U1 u N \
(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种
4 v* R% }' N" N- T- z; g+ z(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种
# a" S) |( d/ e9 Z7 ?二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物" @9 K$ X9 o. S: ]) S( b" y8 k( t
(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒
8 Q& {% Q- V2 B(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒
0 e4 o C! v' e3 F& Y8 y. {(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物
- \8 |! J. w; I* o. w+ ?1 z7 [三、利用植物组织培养技术保存植物种质
+ l t! z" I2 y1 D! O2 z* W(一)植物组织细胞超低温保存的优点5 x! e( v5 Q& b
(二)植物组织细胞超低温保存技术7 O% Z- l4 b: @7 d* ?5 V) @
(三)植物超低温种质保存实例
" Z3 l0 P+ `) K( z, Y0 t0 O3 _. ~/ _四、利用植物组织培养技术合成人工种子
! S* j ? v$ G7 ?. v(一)人工种子的特点6 Y7 k0 T6 Y6 h2 |) e
(二)人工种子的应用前景
, V, g+ H7 i3 D% B( Z(三)人工种子制作的基本技术7 C, `. ]4 _ _8 e, d" k& t
(四)人工种子制作实例/ y4 H1 R0 U$ L5 w1 c |9 L
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产7 d. o- Q9 M1 d- q6 s
一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗7 G# ?; g" Z4 y+ z! Z+ H
(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系
0 n5 C0 [5 T: N2 V* V- L(二)试管苗工厂化生产实例: ?" b# O/ N# y3 u* R9 M/ T
二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品5 `$ ^ U8 l8 g
(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点, q7 J2 U7 ]& w
(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别; \. |* D9 T9 {) l
(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法! [$ @7 J4 ?- j" C2 n6 k
(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例* D7 o4 Q y8 ^2 O8 v
第四节利用植物细胞培养技术生产植物药+ u1 i* h% @; a5 n/ B3 S9 o% [
一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足
1 t' j1 }9 @& X4 N) u# B二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别. w% B* K; E6 r W
三、植物药物生产的主要技术5 s5 M9 p2 i6 z' h
(一)发状根培养技术
: M* x% S6 a$ t0 S5 s(二)两相培养技术
, P2 I' P2 Q" n' S0 d5 k(三)反义技术8 C3 W N- i+ l4 ]2 z5 Z+ o
四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例
+ n& O5 b& t; e& N+ W/ l' n$ Q( _五、植物药工业化生产实例" x0 u* q* U: X; k' {
附录- ^8 m/ l4 i! q3 h1 j( ], ~( Z0 Z2 i
附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表
! b6 L5 {8 x2 Z1 V2 ~) g8 f附录Ⅱ水合物的等量值表
4 ~. z# D1 g4 y s% ~$ E2 F& G附录Ⅲt界值表# C2 ^* u: O4 N6 c
附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图
' T- O: g; o& i( U |
|
发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
