请教有关皮肤成纤维细胞培养

sailboat

打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案
( P$ U- i3 U2 i3 r- \* X还有，看到胶原酶还有分型，代表什么意思呢？分型是什么意思？都可以用吗？
1 v% m2 `) M' [7 V& w( u, ~9 _如果用胶原酶的话，消化浓度是多少？" l: ~8 @) ?* n+ J8 W
最好能系统些
! L1 Q; e  `6 N拜托各位达人了

tangyvhuang

sailboat 发表于 2011-2-23 17:05 ) V2 y8 d, Y. w! q( m
打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案
. F8 e/ O: D+ c. {还有，看到胶原 ...

6 Y8 A! c# p8 L( T  D, }2 i2 V这个我们以前做的都是组织块贴壁的方法，酶消化好像是用胰酶消化的，37度30分钟，没有用到胶原酶，对于胶原酶的分型讨论比较多了，个人比较推荐II型胶原酶的。主要是这个对于细胞没有伤害，消化时间长点没关系，要是胰酶的话消化时间过长的话细胞都破损了。

luwei8157

皮肤真皮成纤维细胞过去用胰酶是因为实验室条件不好，胶原酶比较贵。5 ~( ^2 o2 n0 E% o7 w! d
真表皮分离，用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离。
- i; J& O6 f& z& R组织块法比较传统，就不介绍了。
. x0 ]  e$ v% C或者酶消化法，用325U/ml 1型胶原酶消化被剪碎的真皮组织，消化1h左右，然后加入培养液吹打 100目过滤，离心 培养。

fish_zbw1985

分离组织中成纤维细胞用组织贴壁法足矣，等的时间长一点细胞都从组织周围爬出来了。酶法消化用胰蛋白酶就可以了，如果觉得0.25%的浓度对细胞损伤过大可以选择0.05%的胰蛋白酶消化。胶原酶没有试过，比较贵吧

sailboat

用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离& D  t* z2 h: I

7 j$ I! w2 f6 ]( V2 I$ r请问 可以这直接分开吗？dispase酶消化的作用呢？不会消化下一种吗？

sniper

0.5%TE + EDTA，消化能力就很强了。不过要看做社么物种，如果山羊的话0.5%TE，而小鼠0.25%TE就行
" r7 Q4 A, z% I2 [

OBGYNob

我看过有关文献说用胰酶就好，但是本人使用该方法之后没有成功，伤心中....难道真的要用胶原酶？

runsong

用组织块法吧，我们这里用此法从牛耳分离的成纤维细胞状态挺好的，筛单克隆，做核移植都没啥问题。
6 Z( A* Q# ]3 \& p! y, \前体是细胞要用GIBICO血清养，而且不能换。

pheebs

Dispase 很贵的啊！！！！！！！！！1

receiver1

用Dispase分离表皮和真皮，然后真皮组织块培养法获得成纤维细胞。这一方案最可行。
$ a* P! n2 S* }% L) u, R4 `' R% ?" o# k9 Z1 n+ w+ t: Y
当然Dispase有点贵，但是实验室必备的，因为这种酶的作用比较温和，不像胰酶那样剧烈，一般不会对细胞造成致命的伤害。