关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

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' p4 b, {6 U& |0 \: J2 K  n2 G! R+ P" v3 G4 d- F. @
对的，  抱歉弄错了。2 ~' g8 O8 F; `$ l
或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子
' }7 d( q0 S& j, {; p! T" {
6 m2 B+ p8 D3 R1 {% |效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子. i2 ?) `1 a) e# Y9 a
; A) P+ ?# D; Z8 U
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。
% t, k$ _/ B# L* R2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。% }7 |1 I2 a8 N9 v5 n! F8 L
3、离心转速慢升慢降。
& t& z& w  b: n6 _4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

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- U$ b6 X1 _/ A3 J$ j8 l$ M0 F: B, H' M
谢谢

gsg040222

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' N+ p( L' T$ R$ Z  E# t" {; M1 m+ I; _, {, o6 J% z% j
效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

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1 X  ^0 W- i" p" T  u5 q# i4 t" Y) Q6 b2 x) y) m
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
0 }. o# O6 E4 x7 R  i* p2重悬混匀（不能有团块）1 F1 S8 Z& [' V! @: T+ b/ Q
3血液与分离液比例1:1
# a. E1 L9 ~1 a) m7 A4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
% F" j% d5 M0 H  V5 e9 d5离心升10降19,600G, p4 D# ]. `# m2 E) R
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。9 [# n+ E+ {) A. e' _( x- l5 k
7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体
! A  z: A/ g+ Y/ g' ^8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
% N7 {. P4 f% Y; D8 b' x# n9 A9培养: v: i( F1 D, h, p
我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~