关于N2B27培养基德配置

随风的天使

请教大家，在胚胎干细胞培养时使用N2B27，如何配置培养基，请大侠指教！谢谢！

深海寂寞鱼

to 随风的天使 ：& k& r" r. R& l: |7 a

/ ^) F6 T% L. f7 w. F' Y' e( t+ m     N2 (100x)  5ml/支, B27 (50x) 10ml/支, 直接加入到500ml的基础培养基里（比如，DMEM/F12）就可以了。
2 s* m' }0 m( N& z- b6 g
* T6 w5 V( b) M" b: l2 {% M     这样就是通常文献中所说的，1% N2 and 2% B27。
( O  X, T, @( I2 ^% P- C/ Z. B3 A1 U6 p9 y$ M
     希望我说明白了。

随风的天使

回复 深海寂寞鱼 的帖子+ e7 s9 q. ?5 X% D2 _& K

" M9 @  c# N0 K' P9 R2 v6 ?% G谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的代替血清吗？其余的成分是否需要改变呀？谢谢你！

深海寂寞鱼

随风的天使 发表于 2011-1-13 09:36
% E, X) Z9 G1 A" E; N& z- n回复 深海寂寞鱼 的帖子
( U" w6 H+ {- H  P
) o: ?. N6 C) A+ l' F谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的 ...

, J) q1 g9 N5 d% j* X7 \- E
to 随风的天使：
  N* F2 X7 s# M4 s$ q! s
/ B) e2 z/ \0 q6 @5 M) j" ]  N    B27和N2就是用来替代血清的。血清的成分十分复杂，而B27和N2的成份是完全清楚的。  t* O: c3 ]/ |4 L/ B# [) W

6 \2 V# y6 N" I3 \- U' r    有关B27和N2的具体成份，请你参看论坛里的这个帖子：http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... 2B%B3%C9%B7%D6.html
' u$ ~2 J, s* `9 T! A
2 ^% j, T! F2 B5 M! q% d    这样你也就可以知道，其实B27和N2里面是有胰岛素的。
$ t0 C# F0 f' H% g. r3 n' g0 `- v. E+ `
    我不知道你具体看的哪篇文献。你注意一下它是在加B27和N2以后又加了胰岛素吗？
% h  I# P& b& g1 ~0 U/ E( E/ F2 J" r9 T+ F' z
    如果是这样的话，那么它就是为了提高培养基里胰岛素的浓度。这样或许可以促进细胞的增殖。7 s+ f( X( B  |/ a7 k
7 f. f0 Q* ^8 w  F1 Y) u2 Z
     当然也可能它是有选择性的加了B27里面的一些成份，所以加了胰岛素。+ _/ p) d- Z: C5 g* D1 c" B

& f' P6 l8 L: O! o! v8 p7 M# n     多比较几篇文献，你或许就能发现规律。* x( X  v2 c/ u6 Q+ T, F

6 g" b' ^, [2 ~- ^: {) {     如果还有不明白的，欢迎继续讨论。

cicadacjk

如果你是按照Austin Smith他们的配方，则应该是
3 S3 W7 M" p5 D& q1 m, ?1/2 DMEM/F12 1/2 Neurobasal5 ]! j3 L* }- Q0 f1 I
+0.5%N2 +1% B27
* ~0 L, @' U; ~- Z, c9 L& c这里是他们实验室的protocol. `& a& b) w. a" E+ [' H
我自己试验用Knockout DMEM/F12养，问题也不大
8 N' J8 n- P! B3 h7 P  E9 s
$ ?1 {, v& G- [+ l4 P

深海寂寞鱼

那你完全可以用他们实验室的配方。 Austin Smith的实验室的东西可信度很高。8 O4 r8 T# [( r6 E

) g: E/ [) v, S8 I5 A( W你完全用Knockout DMEM/F12应该没问题。0 f/ d8 X  j" U6 B* J" |6 ?; `# k, u6 r

! j, t2 `$ K& Q你注意他把N2和B27的浓度减半了。
( r+ Z3 {& U; P3 E& j! e. U. F& n! L. z+ @# F2 ^* o5 ^
我觉得你就按你的方法做。只要实验结果是好的。 你发文章的时候就按你的方法写就行了。

安静的折腾

没有加bovine serum albumin fraction V吗  g$ G. q7 T3 ^9 B( r

weddy2009

N2B27 (200ml)  
$ y( k8 @0 s' s% l$ `+ yMix 100 ml DMEM/F12, : ]1 t* c0 H0 V' `' K' c+ T+ j2 o
100 ml Neurobasal medium,
* H8 {. ^. B/ R3 e3 _/ v; Z7 N1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement,
0 K) b( E" G& l  k3 d% [$ J1 ml Glutamine, 200 µl β-Mercaptoethanol.
; l0 r9 U; L  q2 e" Y7 @我们实验室的protocol，很好用的

微笑ci

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: A* @) w" {1 t0 _- T' B3 ?5 J, Z% v( w1 u  ^
你好，请问这个培养基是用来养hES 的吗？我怎么觉得像神经分化用的呢？

weddy2009

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. [5 Z& O) H3 V* g6 U$ d- `  E
1 z& ]: f; ^0 e: y) f# G* i楼上问的是N2B27的配方啊，我就指的是该配方，用来培养mES时的基础培养液