分选肿瘤干细胞到底是用流式还是磁珠好？

caipan1982

两者皆可，荧光和磁珠都会随着传代而消失，相对来说磁珠影响小。) o  L3 U0 l' K( u
而且流式耗时确实太长，所以用流式的话建议将细胞的浓度调高一点，这样分选的时间会短一些，否则对细胞的活力影响太大。4 q  ~9 d: C; f+ |* V" v
而MACS速度快，效果能保证，其缺点就是太贵。现在用的最多的就是miltiney，用它的产品不仅仅是买磁珠就算了，你还得买分选器，分选柱，即使做活动期间这个一下来你就得花个2万了了。    分选注还是一次性的，用完还得买。     所以有钱的话可以选磁珠分选1 G: _' s' ~& q/ E, y0 ]

* m5 J# |: s% T) \) h# D" W# B资金不充裕的话，用流式算了。影响不是那么吓人，以前都是用流式分选的。

jamquit

xiaoma402716390 发表于 2010-12-13 13:48 $ f# u6 }* @, u
用磁珠分选后干细胞可以继续培养，就是磁珠有点贵75%折后还要九千多，好像现在搞活动买磁珠分选柱，还有生长 ...

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对呀 我就是问的美天旎的代理 我准备做的就是肝癌的CD133 请问你说的分选成功了是指用的磁珠么？

jamquit

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6 b( f- Z, S! P( Z9 }0 k7 l  x! _+ T1 G' O, @
感谢回答~~去给老板汇报下。。。用流式的话只要提高细胞浓度就行了么？还有其他需要注意的吗？

hanchao

回复 jamquit 的帖子4 M' z5 o( C* d+ I0 u1 \. d
9 i1 X& c& E/ \% ]
恩，得多次摸索流式分选的操作参数吧。如果有高手帮你做，应该还可以。

jamquit

回复 hanchao 的帖子
" I/ L7 h* `4 V
  \5 T' l7 _5 X, i0 }谢谢解答~~~~

cell-therapy

可以使用Dynabeads，挪威Dynal的磁珠。不需要过柱子、不需要离心。呵呵，做个广告。。。8 _, E8 g0 V3 F( [% ]" O
( H" I' j! _" y, D8 p
分选CD133，可以单独购买高质量的的BD抗体（生物素标记），然后与Flowcomp磁珠结合，分选出来后，可以将磁珠与细胞解离开，用于培养、流式检测，想干嘛干嘛。
0 ?3 h2 n* L# _* ]% x# y4 ?) p5 A2 [& R! _
磁架可以借用，买的话也就3K多，磁珠3K多，抗体3K多。如果搞定磁架的话，总体7k左右可以完事儿。
, x0 d  P+ B4 u% |" @: m* r* ~+ k  ^
多看看文献，多问问师兄，多跟老板撒娇要点儿钱。# g, Z$ _  N2 N5 p0 y( s% t

jamquit

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& x6 O" G" ]( V+ t* l: A4 O$ b* Q* s4 `' {8 f' m. p" m7 y
噗 谢谢解答 找过老板了 决定用两个marker 偏向流式了

cell-therapy

回复 jamquit 的帖子$ C5 J) I( P, j7 @6 P

; R* s1 y2 B8 d, w* |* Z( l( t好啊，期待你使用后能上来分享你的经验。

jamquit

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恩恩 一定 希望实验顺利。。。