一个月的神经干细胞培养，请大家提出宝贵的意见（附图）

荤荤

回复 11# qyguoguo
/ `& m% B. [/ r+ P8 E! D# ?谢谢qyguoguo，打算这个星期买一只孕鼠试试，之前只做过新生鼠，不知道取胎鼠的细胞时是否有什么需要注意的地方？能分享你的操作步骤吗？或者你那有什么视频或图片可以让我学习学习的

荤荤

回复 13# huangfei2010 3 U9 x- Z: A. M

- n5 O. w% K" J3 j
+ J2 \/ U2 O7 N3 V: }" q( K    谢谢huangfei2010，我细胞在培养的过程常出现“聚集现象”，就是在培养瓶的某个视野会发现神经球特别的多，大球接小球的，像手牵手的样子，其他的视野神经球会少很多,不知道你们是否会遇到这种现象。对于此种现象又该如何处理呢？有什么方法能使密度大的地方的神经球分开吗？不然它们都粘附到一块是不是就容易活力下降，甚至死了呢。我昨天就是把瓶子晃晃，尽量使它们分散开了，不晓得这么做可不可以，会不会影响它后期的聚球？

荤荤

回复 14# ouyangjuan $ z$ M; h( z! m$ C

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; u; N; N0 {2 N8 D1 y1 r, a) w    谢谢 有时间我会好好看到

huangfei2010

回复 16# 荤荤
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; Y1 [1 s) |  I, f
* i0 f8 z) F/ f0 W      谢谢你的交流，我说的问题，我也遇到过，我觉得可能是神经球分泌一些细胞因子，相互吸引吧，还有我还看到一些神经球相互融合，不知道你有没有观察过，现在不都说神经球的形成不是单克隆形成的，是嵌合体，我养的神经干细胞数量随着时间的延长，在第二代的时候数量最多，随后就一直下降，也不知道人家文献那个生长曲线怎么做出来

huangfei2010

回复 15# 荤荤
6 {% G2 A+ v, f/ U# M( v- j  D, ~
7 L3 V/ G( h3 [( z) o) B8 Y5 l* d
& r2 [  O1 p! U, k9 k    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2532938/?tool=pubmed9 C6 Z* [0 R+ H# q0 s9 _
你可以打开这个网址看看，上面有个视频，希望对你有帮助

SVZ

回复 16# 荤荤
& s1 I: L/ G2 f
1 F# |" U; O& u# d你说的这种情况我也遇到过，实验室的前辈告诉我可能是消化或机械吹打过度了，部分细胞破碎DNA释放出来，使细胞粘性增加。前辈说用点DNA酶处理一下就ok了。

liqinzhan

回复 荤荤 的帖子
7 }# p; D# u4 u) q% g  r7 _
- J1 l4 o& m% U9 ?6 q7 Z( ^用1mol/L NaoH调节PH值，置4度冰箱保存，可以继续使用的，平时使用时时间不能太长，防止酸碱度变化

hello-jun

我觉得你这个挺好的啊  和我们培养的差不多 像你这么大的时候 我们早就开始传代了

hello-jun

我们培养的时候都是在培养皿里面培养的 我不知道为什么你的在瓶里就很容易贴壁 我的要让细胞贴壁的话 还需要加pdl 加 LN处理以后才会贴 有时候处理不好的话 还比贴  你那个真好 自己就贴上去了

jennyshy

回复 荤荤 的帖子; ^9 Y. b9 {& x5 `0 }# V% ^+ ~
; D. V) {8 Y; z# k! v
我养过胎鼠和乳鼠的神经干9 A# L7 s5 v! d: J8 G8 I# D- l
个人认为胎鼠优于乳鼠2 U1 \! i7 X9 C1 e

+ q4 N/ }4 A# M& K7 j7 @0 C4 T6 z从你初期的图片看有几个问题你需要改进一下1. 原代4d神经球过大，会导致后面几代增值力下降，因为原代时已经有大部分神经干死亡，所以你需要控制原代神经球的大小，不是非要到7d才传代。2. 原代组织消化最好不要用胰酶，会粘连，建议用Accutase  sigma的 3. 培养瓶养是不会贴壁的，如果贴壁是你原代处理的不好