［求助］有关T细胞培养之问题

ET生物人

有些培养基成团严重些，不过这个不是大问题，轻轻吹散一下就好。PBMC最好尽快做，20小时这么长。细胞状态不好，养着会死也正常，尽量加液，少换液。T细胞，特别感染的T细胞都比较脆弱

我是传奇

细胞应是先分化后增殖，第0天就加IL-2，不太合理，另外CD3/28 的量是300对应IL-2是500 也不太合理。接种密度是2百万没问题，问题是你要每天都调整，后期放宽到1百万或50万没问题，总结一下，IL-2加的太早了，后期又不补充所以细胞没长起来。

ET生物人

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如果PBMC后分选出来的T细胞，直接加IL培养液好正常吧

nailute1985

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这个是我们boss给的protocol，3/28加的量和Il2的量据说是验证过的，您说的我每天都需要调整是什么意思？细胞密度么？前几天细胞基本上是不增殖的，细胞数就是那么多，但是培养基消耗很快，如果我按1:1或者1:3补液的话会不会细胞密度太低了不利于T细胞的生长呢？而且IL2我一般是补液的时候按照培养基体积再补充的，不是每天都往里面加。还有，因为我们是做的CD3/28的可溶性抗体，我期间换了一次液，那我换液之后还需要再刺激一下么？

我是传奇

每次补液时所补的IL-2浓度应与原液一致，若换液则需补充IL-2，其他抗体无需添加，你用的什么培养基？有加自体血浆么？

我是传奇

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IL-2受体还没打开，加了没用。

ET生物人

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: `* ?0 k4 x* f. d2 o, Z0 e请问IL-2受体是什么时候什么情况下打开的？

我是传奇

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2 [0 m; V$ k# e8 @( t$ U一般18-24h

nailute1985

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也就是说CD3/28刺激一下就可以了，不需要持续的刺激？我们没加自体血清，我们用的HSA- b) L8 }- _. a# ?$ d: L0 t

清如许231

适当补点血清吧