脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？
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- S0 w# \, R) d具体操作：
! u! @8 [% P" B% O: b1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。$ O+ n& M  {2 l
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。
+ O8 T9 z) n! ^: L. j, P+ \$ g4 Q+ k3、培养瓶用培养液润洗过。0 f1 z8 ~2 v3 M* O/ B
4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。2 F  n' r: u- S, x9 F
5、培养液：DMEM+FBS+双抗。+ `1 b1 a0 c, u1 z

木头1102

有可能是脐带的个体差异，或者放置时间过长；培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了，效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的，如果时间不是很长，可以在等等；如果时间挺长了，就传了吧，注意传代时细胞密度，可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了，看能不能再获得点细胞。还有就是，组织块贴壁法最好只用华通氏胶。

jenny114402

我们都用皿培养，你可以试试悬浮法培养，操作简单，正常基本7，8天长出细胞吧

haibara007007

回复 jifengtang 的帖子5 }' b7 B' X6 Y
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你可以试试把脐带剪得再碎一些，多贴一些，应该会比较好，我们现在都贴很小很多块，贴三个75t，这样基本都可以爬出来

张杉杉

我也是新手，刚刚开始养脐带间充质干细胞，静置7天后观察，一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么？

jifengtang

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8 T  I- o# R" P基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

回复 jenny114402 的帖子! u! X% `6 m2 J3 u
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悬浮法？是指酶解法吗？

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子1 K* s' E2 {  c- Z0 w$ {; L
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大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

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) h5 v4 w. I8 g/ e7 r1 R: o; M: h9 |培养液，血清用的什么？

张杉杉

回复 jifengtang 的帖子" T, B7 X) v2 S3 y, ~
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培养液用的HyClone的α-MEM培养基，Gibco的血清。已经静置培养7天，第八天换液后，又静置四天，今天观察培养基颜色，没有变化。