神经干细胞传代

clujyh430

提取新生鼠海马神经干细胞，传代两天后，发现有细胞贴壁分化，我的传代方法是用1毫升Accutase（sigma）37度消化10分钟后用200ul的枪头吹打70次左右，在消化的第五分钟是用200ul的枪头吹打30次左右，然后再继续消化，消化后的细胞悬液中发现仍然有未消化的神经球，我的培养基是DF12，EGF,bFGF,BSA,肝素钠，谷氨酰胺，葡萄糖，B27
" w. G0 K5 _: z. Q- I$ s0 x' p大家看能做哪些改进，能保证细胞活力，又能消化彻底？

suning5

用机械吹打法，不要用酶消化。

clujyh430

机械吹打很难将所有神经球消化成单细胞悬液，起不到传代的作用，神经干细胞会越来越少

fm100200

我们培养的总是被污染  为什么，还有如何传代呢

NANCYWHN

机械吹打粗暴会对细胞产生损伤，而且不能保证完全悬浮。

clujyh430

有人用过加拿大Stem cell公司的NeuroCult™ Chemical Dissociation Kit (Mouse)，效果怎么样？

蜗牛爱贝贝

个人感觉，如果极少部分细胞不掉，那就算了，不要太过于纠结那些绝少的部分，有可能那些细胞本身就不是需要的细胞，即使时，他不掉也同样说明，他改变了

细胞海洋

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sunyandong

学习

Tim

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$ ~' N2 [: g. ^: i! J7 g6 a3 a% \+ U% H  T. i( V1 L/ y  F
1：枪头吹打次数太多。建议分次吹打。
8 m8 O! e7 Y  \2：消化时间比较长。吹打和消化结合。5 J6 ]  K0 q% ~6 x, A9 m
3：你的培养基是用的什么？