关于染色体核型分析如何做

qingnuanrenxin

干细胞 一般是这样的：( u0 L1 ~2 ]# d5 U
  1，传代后72小时左右，加0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养中  培养2-4小时，消化收集，离心弃上清。 ( G* S% }. x. E1 G4 k$ x
  2，0.75M低渗液（KCL）10ml   37°水浴30分钟  ; R3 n+ j9 N7 d, w7 O% j
  3，加1ml固定液 与固定  37°水浴3分钟  离心弃上清。+ Z3 Q; ^% K$ S9 i. [7 |$ R
  4，用8ml固定液于离心管中，吸打均匀  37°水浴20-30分钟。
% F" K- {" n6 i  5，重复4 二固定  
0 _2 p- G2 O3 I& K- {  ?& y! K  6,50cm高处1-2滴细胞悬液滴于湿冷的载玻片上  自然风干。
# L1 ~/ s) i2 o+ a$ h" @  7。 百分之十 吉姆萨染液染10分钟   蒸馏水洗干  室温风干  
$ ^& i. Z1 c) L. `% ?2 S, ]- v' i  8，片子干后 电子显微镜观察，0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养液中  培养2-4小时，

qingnuanrenxin

这是别人发给我的资料  给大家共享下。

lixiaodong

谢谢。

flydayzhu

谢谢~

hawkyiger

过程太简略，还有不少错误  R2 O: M2 X. L) t+ s6 L5 s0 M' v$ z
1. 中间的离心步骤都省略了，容易误解，一般为1000-1500r/min，时间8-10min2 B8 M! H9 m/ [- x1 D6 i: j4 ~
2. 核型分析低渗液浓度应为0.075M，0.75M怎么伸展膨胀。。。
1 D, R8 K& G0 t: p, b$ ^! Z3. 制片后要经过适当的老化步骤，即标本置于密闭盒中室温放置，否则G带不明显。
( l) i' i9 b0 v# m" \4. 吉姆萨染色前要0.25%胰酶短暂处理，

future007

楼上说的很对，希望楼主下次注意呦

天鹅骨

请问有没有地方可以代做动物染色体核型分析的呢? 因为我要做大鼠的,一般医院里都只做人的,他们说不会看大鼠的染色体.
) F6 l4 r' C( V: F. I还有,不同细胞的制片方法一样吗?

天鹅骨

再补充两个问题哦
% h3 p. K4 ?$ a4 [请问做核型分析需要的细胞量是多少呢? 1 t) G" V, ^9 N4 \$ V. X- ^. o
我上次养了瓶T75 还特意去做了细胞分选 把我的细胞和feeder细胞分开, 分到10^6细胞,觉得不少了, 拿到医院, 医院居然说要10^7 才够!10^6太少,不给我做! 那我岂不是要养10瓶T75才够?那样也太浪费了吧! 但也听有公司说2个T25就行,究竟要多少呢?
) D% o$ Y) O  P' f' a还有, 大家做iPS ES 的核型分析时, 都是怎么把干细胞与feeder分开的呢?是流式分选?还是feeder-free 培养? 我的细胞没有做过feeder-free呢^
2 F2 o0 E6 {. j/ r' {( r恳请大家指教啊!
7 S1 J5 I" D# y; Z9 H0 r  t) s先谢各位了!

qingnuanrenxin

这是我问别人，别人给我的资料  我拿出来给大家分享下  如果有什么不对的地方大家指出这样才可以拿一份完整的资料，共同进步啊

qingnuanrenxin

大家踊跃发言啊