如何提高慢病毒感染NK-92和T细胞效率

txy_love

如题，请各位有经验朋友提高宝贵建议，目前实验转染效率太低，在荧光显微镜下基本看不到荧光，求助ing。

zzyhelixinxin

细胞感染效率主要有以下几点需要注意：3 c5 ]: k. k+ Y8 H
1.MOI值可以试着模式一下，一般慢病毒系统的MOI值在45-80不等；
6 }0 E% m2 q8 ?2.细胞的状态也会影响感染效率，所以在感染慢病毒时尽量在细胞状态非常好的情况下进行；; _' a3 i; Q5 f5 J. O7 N% x0 G8 e. }
3.感染的时候加促感染试剂；$ }$ J0 g4 N0 Q. O1 E% E6 ^
4.病毒的滴度和纯度要高

txy_love

问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

细胞海洋

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看3楼

细胞海洋

回复 txy_love 的帖子1 V0 y# S* e: G. _5 {7 `$ L
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你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样% |! M1 a) b/ Y8 B2 O1 ~

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txy_love

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" p/ _2 i- o' K
* I5 f. v! P7 K1 D* P% M  o问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

zzyhelixinxin

回复 txy_love 的帖子! G  g  n# c1 P/ `; ^) Y2 e

# G% l. C' ]9 G3 y* k体外实验10（7）IU/ml的病毒滴度偏低，若你的细胞是比较难感染的细胞，这个滴度基本没有多大用处，病毒滴度在10的8次方效果会好很多。

txy_love

回复 zzyhelixinxin 的帖子% ?% U' F' [9 E6 Z

; I% o" W3 I. t7 E* s7 z6 L细胞的确比较难转，不知道你可用过millpore的纯化柱浓缩病毒上清？与超速离心相比，浓缩的病毒滴度大概要低几个数量级？

zzyhelixinxin

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7 b) a2 ]$ P$ S" C% S+ \  `9 G" a! J7 V
millpore的纯化柱浓缩病毒效果不如超速离心，前者会损失很多病毒，一致导致病毒滴度偏低。建议找其他实验室借用超速离心机进行浓缩，或许你会发现效果好很多。

yuanyecat

你要用用life tech的病毒包装试剂盒吧，那个效率还是不错的。