求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

jc_484

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

孙帅帅

! z3 m- z9 ?8 t" P' [, p  }

. e7 Q$ X3 x  ^% P5 N  如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！  关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

不倒翁

回复 孙帅帅 的帖子& o) a8 V, E% g( H/ I: P, h% z3 P; f0 Z
% |( F7 ?1 c! `! e6 N
小鼠用EDTA？

fuyinsheng

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方
; B$ ?' X% I0 m! I8 a4 J% ~* a+ z培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）
- k+ X, M, c; q3 Q& \7 T1 w0 S; x消化用0.25%胰酶消化4min

wbj1983

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8 A5 [9 m$ l9 O! }+ c; ^
* O. [* v7 e4 h7 T; I$ m, i: `基础培养液：knockout DMEM
2 F, H. {" P/ D4 F/ sFBS:20%
. s; `+ @1 O8 M% Q1 u- z, ?NEAA/ f2 O: ?+ I# ~0 W( {' t9 [* `
Glutamin
7 ^$ ~: ~* ?+ H' yb-巯基乙醇
% s; ^% M1 D5 J4 ?( YLIF:1000IU/ML
% ~9 X$ T  u% |" i7 Y8 U
: t2 P, o2 K2 ^+ v. i消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

孙帅帅

回复 不倒翁 的帖子" \2 y: `" ~% |; n$ K
6 ~/ c. E5 k8 b0 M8 ~: Q- B
看错了   还以为是人的HES呢

Serene

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; ^6 W! U7 U- e; ~* I2 g! T8 q8 E$ I. F% n' b
DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF
) A  F5 E' ^8 H. c这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF
  Z, y1 r* h0 g" o* C# G0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，