复苏胚胎干细胞异常！！！！求助

xuehu20

冻存复苏后的胚胎干细胞形态异常，分析原因无解，求大牛帮忙解决问题！

孙帅帅

可能原因：3 w2 R: n4 t! L5 X1 r
（1）、EDTA消化时间过长，对细胞损伤太严重；
" B: x4 G2 Q2 q" p（2）、冻存时细胞吹的太狠，把细胞都吹成单个细胞了；
. o9 R& ]1 j5 X（3）、有可能就是细胞种子本身就不是很好
" p: G+ i5 S) a3 P

xuehu20

回复 孙帅帅 的帖子# W* _8 |) ?/ C- A$ F- v
4 A9 w) x/ J" N
消化时间都和之前的一样，就是复苏的时候有时候很好，有时候就是现在的结果，操作什么的都没有改变过

xuehu20

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% s  ?: K: C( f冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的，消化的时候用的是EDTA,就是复苏的时候有时复苏结果很好，有时候就是现在的样子，不稳定啊，纠结。。。。

gghywtfz

( ?- Z0 z+ q& k9 `* F( `

xuehu20 发表于 2014-3-20 16:37 + C! u$ `6 o; Z
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" M! ?- J2 }& }& i) \4 j+ e冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的， ...

; R, N0 W0 v1 @. @$ b) s# v/ V( h
1 h( o! Y; @7 i& S
其实自己配的培养基里含血清，如果批次不是很好的话，会引起细胞容易分化。9 [/ Y* b! G/ y( H. X/ n
$ ?! Q/ R( n& d4 T0 z5 g/ E% u3 I
其次的话，冻存的细胞团块大小建议大一些，看你图上的细胞团好像很小的样子，而且密度也很低，不知道是复苏以后第几天时候的细胞？

Jonathan

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7 j5 C9 {# e( I: F; |$ n( H9 h$ s) d8 X6 o* A4 N! v" M
H9？

wangshumin12311

你这细胞没有问题，刚复苏有的时候冻存效率低或者细胞冻的少，克隆小就这样，这应该是人的ESCs，不会像mESCs那么强悍，长大了就没问题，放心的养，，，冻多些，复苏加点rock inhibitor$ n9 O3 d9 Y- ^3 N$ V1 r

紫电苍炎

个人感觉你这会不会是接种密度过稀，导致的？4 s- h+ |  @( z3 {0 C4 O

( K$ Y& {+ w6 {

xuehu20

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# W5 y- B2 {- Q) s3 g$ O6 L7 {2 e, I0 \/ j8 s
是H1呢