复苏胚胎干细胞异常！！！！求助

xuehu20

冻存复苏后的胚胎干细胞形态异常，分析原因无解，求大牛帮忙解决问题！

孙帅帅

可能原因：( {+ q8 v. v3 R$ q. m$ [
（1）、EDTA消化时间过长，对细胞损伤太严重；
& X% T, n: A0 h1 X1 n1 C（2）、冻存时细胞吹的太狠，把细胞都吹成单个细胞了；! \2 b# ]7 \6 {  h+ _2 T8 c* c
（3）、有可能就是细胞种子本身就不是很好2 L% A$ g# b  R! \6 X2 g

xuehu20

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: l- s/ W4 |2 a6 w0 K3 d* z# Y$ ^
& k- R4 s4 B( U/ Q7 E+ C消化时间都和之前的一样，就是复苏的时候有时候很好，有时候就是现在的结果，操作什么的都没有改变过

xuehu20

回复 加拿大STEMCELL 的帖子& y8 O0 k1 ?2 l: L* v9 n

7 v' W# ]$ M5 j冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的，消化的时候用的是EDTA,就是复苏的时候有时复苏结果很好，有时候就是现在的样子，不稳定啊，纠结。。。。

gghywtfz

# i$ y5 n( q0 W) M- m. g

xuehu20 发表于 2014-3-20 16:37 " E6 P- u* H2 W& t* }
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1 k* M8 Q& T4 V" {. X( ^6 L9 L8 c  T% S$ @, R- l  V
冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的， ...

" o! ^' a( y, E. v* U# x& q0 k5 e; ?" p5 {+ l# i5 T/ x3 ~" T
其实自己配的培养基里含血清，如果批次不是很好的话，会引起细胞容易分化。- @" B$ r8 c+ ]5 n) Y, d# W

& f7 L5 S% ^1 J其次的话，冻存的细胞团块大小建议大一些，看你图上的细胞团好像很小的样子，而且密度也很低，不知道是复苏以后第几天时候的细胞？

Jonathan

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* m9 C6 b2 |5 C' u, S
7 Y* u. ], h* [7 C+ }/ _$ I! i: XH9？

wangshumin12311

你这细胞没有问题，刚复苏有的时候冻存效率低或者细胞冻的少，克隆小就这样，这应该是人的ESCs，不会像mESCs那么强悍，长大了就没问题，放心的养，，，冻多些，复苏加点rock inhibitor! D( e0 v, S& [% I1 f" `

紫电苍炎

个人感觉你这会不会是接种密度过稀，导致的？: G4 |/ {& g" D3 q; u

* a: e0 E9 ^) ~1 F2 f( N

xuehu20

回复 Jonathan 的帖子6 G7 {5 U# W2 {2 r' r/ L/ y
0 p+ X3 D- g' S9 J2 t+ V  S6 \
是H1呢