复苏胚胎干细胞异常！！！！求助

xuehu20

冻存复苏后的胚胎干细胞形态异常，分析原因无解，求大牛帮忙解决问题！

孙帅帅

可能原因：3 _/ u* p1 c; R4 e% \
（1）、EDTA消化时间过长，对细胞损伤太严重；; ]; k9 T4 o- h! H; V& \3 V% i
（2）、冻存时细胞吹的太狠，把细胞都吹成单个细胞了；- l/ S2 z$ g2 Q) h2 n# O' q
（3）、有可能就是细胞种子本身就不是很好
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xuehu20

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; ^9 y/ C' {( i7 p消化时间都和之前的一样，就是复苏的时候有时候很好，有时候就是现在的结果，操作什么的都没有改变过

xuehu20

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冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的，消化的时候用的是EDTA,就是复苏的时候有时复苏结果很好，有时候就是现在的样子，不稳定啊，纠结。。。。

gghywtfz

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xuehu20 发表于 2014-3-20 16:37
% L; @1 Z" }2 D  a回复 加拿大STEMCELL 的帖子
% k' N4 k& V8 Y. i+ l; ]& a% D& a3 S! p5 R* B4 F! n1 S
冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的， ...

7 e. _! K! k8 d1 t8 G' K& e' y
  u9 I8 \( n! A, M7 O- [0 ~其实自己配的培养基里含血清，如果批次不是很好的话，会引起细胞容易分化。1 b$ W) W7 t; h/ S" j* o

  q# C9 O4 v# _; s8 }/ u) ~- m其次的话，冻存的细胞团块大小建议大一些，看你图上的细胞团好像很小的样子，而且密度也很低，不知道是复苏以后第几天时候的细胞？

Jonathan

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+ b) O' E, ]- S$ K3 Y3 n3 k% E) j4 w: z4 D% [" \
H9？

wangshumin12311

你这细胞没有问题，刚复苏有的时候冻存效率低或者细胞冻的少，克隆小就这样，这应该是人的ESCs，不会像mESCs那么强悍，长大了就没问题，放心的养，，，冻多些，复苏加点rock inhibitor. Y% j- \9 d/ R# B/ `

紫电苍炎

个人感觉你这会不会是接种密度过稀，导致的？
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xuehu20

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. ~! o. V# e1 g) [6 D; R/ c是H1呢