复苏胚胎干细胞异常！！！！求助

xuehu20

冻存复苏后的胚胎干细胞形态异常，分析原因无解，求大牛帮忙解决问题！

孙帅帅

可能原因：0 [0 }0 v! W! z/ V; N
（1）、EDTA消化时间过长，对细胞损伤太严重；& H1 Z& c  {+ _. b4 V
（2）、冻存时细胞吹的太狠，把细胞都吹成单个细胞了；- K: P, {  ?6 i& C. E+ B% a, u9 t  z
（3）、有可能就是细胞种子本身就不是很好3 y3 q& ~3 g! X  o

xuehu20

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1 T: t9 [/ o9 `3 X3 ?8 H4 y2 ]# ]* X# Z" n0 u! O* _+ l" M
消化时间都和之前的一样，就是复苏的时候有时候很好，有时候就是现在的结果，操作什么的都没有改变过

xuehu20

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* b. O  ]# d7 u* n8 }% _; Y- e
  g8 c/ b( d7 i( E! [冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的，消化的时候用的是EDTA,就是复苏的时候有时复苏结果很好，有时候就是现在的样子，不稳定啊，纠结。。。。

gghywtfz

4 F  s; a8 [8 t8 C6 I- e( l/ I+ \6 k

xuehu20 发表于 2014-3-20 16:37
& Q4 t+ }) G2 O' X( R& d: z  W回复 加拿大STEMCELL 的帖子3 D8 v, E" X. T" L$ L8 l
; T: [. V" J' v6 H
冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的， ...

1 s" n  r* H$ [0 ^; ^( N) L; \4 P7 S: ~! F( U( t3 @" f- {# q
其实自己配的培养基里含血清，如果批次不是很好的话，会引起细胞容易分化。
# @( {4 x6 C' t  g: h
4 J% U# }& s  l+ n. a; P其次的话，冻存的细胞团块大小建议大一些，看你图上的细胞团好像很小的样子，而且密度也很低，不知道是复苏以后第几天时候的细胞？

Jonathan

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4 `) |. o7 G' n; o2 x# Y4 j- q" V6 {- o9 H/ [" }; b8 K
H9？

wangshumin12311

你这细胞没有问题，刚复苏有的时候冻存效率低或者细胞冻的少，克隆小就这样，这应该是人的ESCs，不会像mESCs那么强悍，长大了就没问题，放心的养，，，冻多些，复苏加点rock inhibitor
1 H) E8 _- `) O

紫电苍炎

个人感觉你这会不会是接种密度过稀，导致的？
8 y0 p' ^/ G$ ]! D5 D( i8 x7 ]- [) f
# s0 M, i: V$ X& _1 ~+ T

xuehu20

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& n- R4 ~+ t# M$ U2 h, g  p7 C6 q9 l& k, k0 e7 o
是H1呢