大家谈谈你们是怎么培养ES细胞的？

runner

刚接触ES的培养; J/ e# B6 L$ T' E6 l6 T. W
新实验室规定MEF和ES每天都要换液，而且消化的时候要37度消化满5分钟: G2 [" E7 v  @$ {- H" ^% n
6 F, W2 a% p# x& S
我以前养其他细胞的时候，一般都是隔2～3天才换一次液的，细胞消化也很快，基本上室温几十秒到两三分钟就消化下来了。% P9 m6 b' q8 X' a3 Q0 i
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请问大家，有必要每天都换液，每次消化都要满5分钟吗？（肉眼观察3分钟细胞已经成片脱落下来了，很担心会消化过头）

decloud2009

隔天换液可以的，，消化也不一定要5 分钟。只要看到脱落了，镜下也脱落下来就可以了阿 。干吗一定要这么死啊。。

BenHantun

我觉得培养ESC，勤换液还是比较好的，但是消化细胞，还是自己掌握时间吧，只要镜子下看到绝大部分细胞消化下去就可以了，消化时间长反而对细胞不好！

czzhaozhu

从我培养mES细胞和hES细胞的一点经验来看，还是每天换液对细胞的生长状态好，最好每天都在固定的时间换；至于消化时间倒不是非要5分钟不可，只要细胞从皿底大部分脱落下来即可。

chendongbo338

你们细胞如果消化5分钟，细胞状态还好吗？7 t# n) y% l" }) K
我消化R1细胞一般只有在室温消化1分钟，细胞开始脱落，没必要那样死板，消化的过程中可以看一下细胞是否脱落，再决定是否继续消化，最好在消化前用PBS洗两遍

wuhonglian2008

我个人养ESC也是每天都换液的，但MEF一般两天换一次依情况而定，消化我一般放在培养箱2分钟拿出来看看，根据具体情况在决定是终止还是继续消化！

开心果王

可以根据细胞的生长情况来决定哦，向ES这些都是比较娇贵的细胞，应该用低浓度的胰酶/EDTA（0.05%）来消化，时间不要太长，1min左右！显微镜下观察，大部分消化下来即可，终止的时候用培养液轻轻吹吹即可！

栀子花开

回复 1# runner
( e$ G( n$ v% j
" r' f4 H4 N0 D& B' u
4 K# U1 L, ~+ {" s" s" P6 M# r    消化这个步骤不能把时间定死了吧，应该是要在显微镜下观察，就像上面同仁说的，有多数细胞脱落即可，此时你稍微轻轻摇晃下，其他细胞即可脱落。
/ }! c: R" F4 l& Q7 S消化时间太长，确实不利于细胞的生长啊！
  m1 T. R" a# F+ b5 T# R不知道说的有没有道理

niyou

回复楼主：
" {6 D6 _( ]! r, P我做胚胎干细胞培养（mES）已有六年。我谈一下经验：
+ y# u( J! y5 N: E6 \% b3 i. U0 M0 o1、最好每天都换液，最好每天都在固定的时间换；
# X. S! `  Y; c- e$ k$ X2、用0.05%的胰酶（Gibco,含0.02% EDTA）消化30秒-2分钟，其实1分钟足够，关键是提前将细胞用37度预温的PBS洗1－2次，加入已37度预温好的胰酶，效果很好。消化时最好在显微镜下观察，有多数细胞脱落即可。

旺旺

我也是每天换液，基本固定时间，