小鼠胚胎干细胞到拟胚体阶段

fwj81

去lif的ES培养基悬浮培养3-4天即可

智露

回复 fwj81 的帖子1 F8 a9 j; r. B9 B3 C

! S6 W2 k5 Y1 U* N) }你不用悬滴几天吗？

智露

回复 ciweiyuan 的帖子: x$ O' G1 f: x7 ~+ Q5 r& l$ X

* G' z* b. P( P4 d5 x* ^1 M2 ~- `2 \! o5 K4 ]. [
这几次悬滴，突然每滴里面都有好多小小的球，没有聚集成一滴，也没有什么人用那培养箱，怎么这几次没有聚集呢？我有的拟胚体悬浮2天的时候都是圆圆的，怎么到第三天后就开始变差了，边缘就分化了，就不圆了呢？期待你的回答，谢谢啊

ciweiyuan

回复 智露 的帖子, P+ G( Z' x( z
  s# O0 F! k* J$ x* n2 q) D
有两个问题你要确认：9 i& P7 `" c+ A% d
1.你的mef有没有去除干净+ y+ {  I7 P' y0 t5 O1 j9 i# r$ @
2.你的干细胞有没有老化，你要选择生长状况良好的干细胞来做拟胚体，判断状态是不是良好有一个很显著的指标就是克隆的生长速度和克隆的周围要圆润，没有分化的细胞存在。" A$ ~+ E5 b: h# r5 ~9 }
希望对你有帮助

智露

9 M* S, V* e- C0 Q+ j( N

# g; n) m- J1 b1 p$ e3 D回复 ciweiyuan 的帖子8 R" E9 p' d/ E# e( Y) X* I

! @. C9 r% d+ h# i5 r7 D" ?你说的状况很对，我们现在买的feeder不好，基本第三天开始就会凋亡啦，所以培养在上面的ES边缘就没有折光度了，有一部分分化啦。一个孔中能看到一些好的ES，也能看到一些分化的ES，其实我是想问，是不是ES不好，就做不出来拟胚体？普通的细胞悬滴2天不会聚集成一滴吗？是想问你除了这个情况还有没有其他的情况？

ciweiyuan

我可以很肯定的回答你：
) [# Z4 B: ^8 k, K7 v1.ES不好做不出来拟胚体，拟胚体的定义是能够分化为三个胚层的前提，细胞都分化了怎么能做的出来呢。
# {' B- x) E" ?9 P' C2.普通的细胞悬滴2天不会聚集成一滴，你要知道聚集成一滴是由于细胞高速增殖加上分化形成的，普通的细胞生长速度没有这么快。
5 \( ^# b/ S7 I! |3.是想问你除了这个情况还有没有其他的情况？关于这个问题，我想这两个方面是最主要的，mef状态不好，首先es克隆要分化，其次状态不好不容易通过差速贴壁法去除干净，对后续es你胚胎的形成影响很大。
  f- _+ b; C- T) P' j2 p3 Y9 Y希望对你有帮助，我认为现在当务之急是先解决mef的问题。

智露

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. i- k, E) p% K5 I. k, a: d) `$ `/ n- u4 g: e
你们的mef细胞从哪里买的啊？你们差速贴壁多久啊？

ciweiyuan

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) Z, \6 Q$ c4 p8 J9 S
. r1 Y4 O1 G" H中科院细胞所和allcells（上海）都有卖的