大家包装的慢病毒滴度是多少（不包括浓缩）

ying

回复 huangcong1988 的帖子: ~" _% O* {2 Y, I, o) q) _2 V  _

/ F5 _" b7 n& ~4 ^% Z* q, B& ]) [/ y按这样说来，确实是被稀释了。
* a7 W' p( j9 \" n不过，通常我是这样认为的:+ M' C8 K  Z& g  w, G
一开始没浓缩时，假设体积是100毫升，
5 y: U6 T- H2 t9 P浓缩后，变成一个坨坨，
6 ]& r9 G0 f' t把这个坨坨用1毫升的溶液给溶解了，, K& x  M: D7 f% T# o
假设病毒没有损失率，那么就算是“浓缩”了100倍。因此用我的观点看，是“浓缩”了。

ying

回复 salomemao 的帖子; t( W) H. I; m: ^: y4 A( l
# {1 d1 k. g9 @# e1 K0 a
转染三质粒的时候，我们实验室的protocol是不加双抗的，据说双抗会影响我们的体系的转染效率。原因我也不知道。之后十二小时后我们认为质粒已经进到细胞里面了，所以再加上双抗防止污染。

salomemao

回复 ying 的帖子7 @( z( g( B6 N  X
# s- C+ I+ _4 r& g! o
你们平时养细胞的时候都是加双抗的吗？

ying

回复 salomemao 的帖子
& W5 @2 v8 n' z" v! j1 s; o1 }9 v) I* x( ]+ v, @1 y: m
是啊，让你见笑了 ：）

huangcong1988

( L# }, |% [% y7 T( w
. x: Z0 x/ t' t; w+ L/ @" K回复 ying 的帖子+ I) ^6 N! S/ d  K, W: q
5 O4 j4 `5 v/ N, q. [
100ml？这个离心起来怕是比较麻烦，您是在10ml（或者15买了，亦或者50ml）管里面一次一次离心弃上清么？一般来说，我们是直接15ml上清液（于50ml离心管中）离心，估计最后那剩下的一坨坨大概150ul，这算是浓缩了一百倍，然后再加1ml左右培养液，所以觉得最终只是浓缩了10几倍

ying

回复 huangcong1988 的帖子& P; _2 S7 p5 v% l4 ^
: D/ {# C# j+ C8 W2 h+ i8 e- r
我是用50毫升离心管，PEG6000和浓NaCl来浓缩，低速离心。一次可以离35ml，最后溶在400微升里面，扣除损失，估计浓缩应该在80倍左右。我还用超速离心法浓缩过，那个方法得到的坨坨很少，因为坨坨主要是血清里的蛋白，超离的时候很少下来。超离我是37毫升最后可以溶在大概200微升甚至更少。

salomemao

回复 ying 的帖子
8 K/ k% m) ~: ?. z' M8 r- I/ Q$ j8 C/ |
3 S7 z  U3 V* X5 i4 c谢谢你的细心讲解，以后我们可以相互学习

ying

回复 salomemao 的帖子
3 S$ k7 U9 W0 H% N$ i
7 y& I8 Z7 c$ v  U

sunyuzhu10

学习了，我总是包装不好，也是英俊的系统，不怎么看到荧光，大家说英俊的PLP1 PLP2 VSVG怎么样啊

huangcong1988

回复 ying 的帖子
* a+ N  F5 J; f. L" s6 W* I2 a
1 f2 v3 g% R% v5 d& o' z% `我也是用低速离心来浓缩，不过我用的是PEG8000，50ml离心管，一般我是5mlPEG8000母液，然后加15ml病毒上清，然后离心。你一次离35ml上清液，那你不是包毒的时候要转好几个大皿么？工作量确实够大的。还有，你这个浓缩后的滴度我保守估计能到10的九次方左右，直接用？