有谁从睾丸组织中分离过初级精母细胞吗？

随心

想从睾丸组织中分离出粗线期精母细胞，有谁知道具体步骤吗，睾丸必须是新鲜的吗？可以冷冻吗？可以的话在多少度冷冻？？？谢啦

jhu132llh

问题比较多- T5 `% C/ I& f% i% j, L9 k
一个个的回答吧
/ X7 s! s# u/ S$ H1.睾丸必须是新鲜的吗？可以冷冻吗？3 u6 A; m  s$ A! X& c
睾丸最好是新鲜的，但也可以冷冻保存的，就是要选个好的冷冻体系，一般复苏出来细胞活性还有90%左右或者以上就可以了" J' O( }9 M; [9 x
加拿大有个组有个博士专门做这个，发了文章了还有他的博士论文，以前看过具体题目我忘了，可以搜索一下，效果还马马虎虎/ H" I9 e) z  ~$ `
2.可以的话在多少度冷冻？？？3 t) M4 B% k/ c9 Y4 I7 n% C
短期可以再4度保存，大约1周-1月，再长期保存的话可能就需要-80度或者液氮保存了
+ r! ^9 \0 t) Q8 d& O3.想从睾丸组织中分离出粗线期精母细胞，有谁知道具体步骤吗？
, x& ~, m* v# ^/ S4 g: }这个好像没有看够这方面的文章，要是分所有的生殖细胞还有很多的文献

随心

回复 jhu132llh 的帖子5 R8 W; {- e: b2 I1 w  O2 p

2 G" r+ J8 h$ a: t谢谢你哦，感激。你有这方面的文章吗？分离别的生殖细胞的也可以，有具体做法的？谢谢

490096812

1，取到新鲜的睾丸组织（注意保存）+ j/ B& _, o* h7 }5 @' r! x8 s+ b
2，消化分化得到细胞悬液
# G- @$ ~. n) E4 a/ \% y3.可以利用梯度离心或者是差异贴壁进行纯化细胞（细胞不纯
) W0 Q3 e, K% z4.如果需要的数量少可以进行单细胞分离

490096812

1，取到新鲜的睾丸组织（注意保存）
- ?; I- H  w; C( g" v' Z2，消化分化得到细胞悬液; L3 s. p, L; I9 I) J' Q0 R$ q
3.可以利用梯度离心或者是差异贴壁进行纯化细胞（细胞不纯
  ]: `- v, W3 z2 T5 s/ A4.如果需要的数量少可以进行单细胞分离

490096812

1，取到新鲜的睾丸组织（注意保存）0 z+ J2 z- a8 u9 `
2，消化分化得到细胞悬液+ U8 {( L6 X+ j
3.可以利用梯度离心或者是差异贴壁进行纯化细胞（细胞不纯4 i7 L% q" u$ e8 |2 @6 d
4.如果需要的数量少可以进行单细胞分离

jhu132llh

回复 随心 的帖子. x! v9 E' Y! I- |8 U+ ]; I
6 c3 k0 d* N1 D% ^3 J
好的
1 f) L+ N/ D  [5 k% R9 J, ]% z给你发几篇经典的生殖细胞分离的方法和一篇培养液使用讨论方法吧
. N( O; H/ w/ L: \: w3 j5 M2 L' P/ w他们主要是分选培养精原干细胞的
% {- O0 C7 e2 F+ X方法步骤都很详细，照着做肯定没问题的8 t+ u! E8 d& u3 ?) |
你要是不分选干细胞的话就做到laminin包被的时候收集未贴壁细胞就是非干细胞类型的生殖细胞
/ G% g  `* ?0 G, b
/ L+ p$ {! T% h' o
0 o; M' c8 B# ]; [

随心

回复 490096812 的帖子  \( ?% h6 l5 x" v4 T

8 i- ]0 j7 m- I) F. q% P取到新鲜的睾丸组织（注意保存）5 y! b6 B( C3 B
如何保存？必须保证新鲜的组织马上开始做还是可以冻存呢？- o/ W4 G2 l3 d" F2 |& i5 L
谢谢

490096812

可以冻存，但是太麻烦了，我们是放在PBS中加双抗，储存，几个小时没有问题，放到一个保温箱，里面放上冰袋，

随心

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! r, y1 |( b0 m' H; p- |! t1 f1 c6 K! c0 \8 y! E3 }3 W
你好，是这样的，我想做方面的东西，但是周围没人做过。所以只能多麻烦你了。4 k  t0 `2 g6 J& I1 p. Z% D
因为我的实验需要，当时采样时没办法直接做，如果不能冻存，现做我是没有时间的。所以就算麻烦我也要知道按照冻存的方法去做。请问你知道如何冻存吗？有文献吗或者操作步骤吗？
. U  U) K6 o  y6 Q* N) L1 N; D' j& r# M7 n+ W! I
再者我是想从睾丸组织中提取粗线期精母细胞，单独拿出这种细胞做涂片染色用。给您一篇文章，试验方法中有Preparation of meiotic spreads，但是他是新鲜组织的，不是冻存的。但是我也是要做SCP3和H2axa染色的。2 S/ ^* L4 ?2 S* F( }
$ O; X( K& d: A8 C
0 O  w* E  @) D# a
所以帮帮忙啦，，你知道怎么冻存吗？