今天丝裂霉素处理MEF出现了问题，谁能告诉我啊

chenchunlei

    丝裂霉素处理MEF2.5小时候，用PBS洗了5遍后加了1.5ml胰酶消化液，但消化下来的细胞成胶冻样，怎么回事？之前没有过啊3 ^1 @' ]6 N$ N& b: N

懵懂干细胞

是不是消化过头了？细胞质黏稠物质流出来了吧

细胞海洋

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建议上图

chenchunlei

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  J* f/ N, O6 K9 x/ y" W; O& _  m# o; n+ @- c
我一看不行，就给扔了，接着又处理一板，今晚又得奋战12点啊，苦逼！过会看看行不行，不行必须上图求高人

cochongg

这粘稠与MMc没有太大关系，应该是因为过多细胞死亡，胞浆，最要是细胞核，还有一些酶的作用（DNA酶、RNA酶）使其粘度加大。8 O$ O' M5 \, `5 f; h0 w
建议：镜检7 F$ C: Z/ v4 a% L3 ^
具体需要镜检观察才好判断，
3 \5 E. f4 k& a* h4 N- y如果离心后不粘稠，传到瓶子后粘稠的话，那好办，建议你离心后，重悬，置于4-8℃冰箱5-15min

zhusealin

可能是胰酶消化过度了吧，消化下来的细胞镜检一下，看看是不是都成细胞碎片了

yuanyan2010

回复 chenchunlei 的帖子* D8 X8 S, \9 ^

! m) Y2 T( b( V5 s" W% o1 f7 g洗5遍这么多啊。我们都只洗2-3遍的。。。没必要洗这么多吧。。。

momocy

我们是洗3遍的，估计是你洗的久了，消化久了，因为粘稠可能是细胞破了，里面的genomic DNA出来了，所以粘稠。话说，我有个疑问，丝裂霉素处理后一定要洗3遍吗？如果只洗一遍行不行，有人试过么？

抹了个茶

回复 yuanyan2010 的帖子5 F6 u! w# l; i7 A$ D5 n
: A# d8 ~: q0 k
我都不洗的 没那么多pbs  而且我们都不用一次性的移液管 否则太浪费了

抹了个茶

开个玩笑。。
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