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看了很多家公司的资料也做了一些实验,现已经得到不错的结果,特总结如下:
, w( a9 |# L9 N4 d5 {! P) F5 c' m3 \2 X3 |. T% d [) h
1,2.0包装系统的PAX:MD大约2:1或者3:1,转运载体的用量是前二者之和,比例很重要。, T' E z2 P' d0 ~: O! p
2,转染效率没有问题的话,理论上293FT比293T包毒能力更强。
7 N$ @( a' s' Y( J; t5 C/ ?5 q3,收病毒上清的程序是:转染24h后换液,之后每隔24h收一次,总共可收3次,理论上48-72h的阶段是病毒产生的高峰。,
- T" p: Z6 |1 u- K1 h7 N4,然后用超速离心或者SBI公司的PEG-IT进行浓缩等等,浓度病毒放存-80,冻融一次,病毒滴度降低一半。
0 J4 r% j8 w% F7 O. q2 j5,最后,感染时候,细胞处于分裂期最好,密度在50左右,感染时血清存在影响不是很大,但是无血清会加快感染(本人亲测)可添加polybrene(4-12ug/ml),感染时,培养液的量仅仅覆盖细胞表面最佳,有报道称将培养板离心,感染效率将大幅提高。4-6h后,补充培养液体积至标准体积。如果一次感染效率不高,可12h后进行2次感染。. B' i8 \* U. U* f3 k L' Q( C
: p" H5 P6 {7 B* t2 o1 I# `" m# P总之病毒的滴度是最关键的,高的病毒滴度,高的polybrene,以及无血清感染是可能有毒性的,GFP摸索一下。附一张感染后48h的GFP照片: B- z/ A+ o1 c1 I( B: q
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