建议及问题贴！都把疑问发这里吧，别发其他帖子里，难找

泡沫清风

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9 P. ^% I# L# N+ d, ~. `! ]建议和问题都堆到这边来 ！这样便于查找和回答5 a' x5 e! _5 \$ R$ A6 y) y

8 c8 I4 n: t/ [, b  Z$ U" ]+ s- Y我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化
0 N. ?; ^' |/ A; }" L因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

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) ]6 B2 j/ ?2 v* I" Z( a
4 K/ _0 {( x, U  P$ t, `
have-a-rest 的问题：# Y  }( s3 I* G0 Q' ]
1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠
& e+ n5 z: ~6 N2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗! {9 _4 M& Z7 a+ x
3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

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! o7 z& j( F# n' F/ X
2 q5 g: m2 M; Y8 ^8 d; v- O1 ]hualin840518 的问题：
8 P. }/ g: J! y9 Y1 x0 wnikon的荧光显微镜自带的成像系统

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9 ~4 I- I; E% F; D2 `& }% e( w
mvirus008 的问题：
  s3 L- k* H8 i% _) |9 L) r+ g: W可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！$ J7 \+ u. \2 Z7 \
而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏8 ?' C9 h4 p0 U( `4 D3 F! z
美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题
9 ~/ b5 B2 b, O6 f4 z7 J, w293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

泡沫清风

6# gemstone
4 K. Z( D8 F) [' m7 _/ E8 x8 u
- ~" z2 m. a  n' G! ^7 H/ F9 a呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！4 p2 s* ~0 V% T% F4 Z. c# \
转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

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8# wangming
" @3 d1 r4 V" j# b; O& @我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？