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回复 1# hany2007
( C- H' ?4 Q! D8 O% B6 n3 H
5 E; _& s, }! ]. P" n% a3 N3 x# r8 [' F嗯 做肿瘤干细胞的确需要耐心 尤其是不顺利的时候。针对你的困难,我可以给你几点建议:
, e9 p S3 u9 A# v# L* Q1. 肿瘤干细胞的富集不必要用化疗药物刺激,原本刚开始原代培养,细胞状态就不稳定,并且很脆弱,如果在强加一些外界刺激,想要获得CSC很难。如果是细胞系你可以用药物去筛选。原代培养的话,你可以先尝试一下能不能分离出相对纯一点的胃癌细胞,在5代~10代之间,你用低粘附板养,富集能形成sphere的肿瘤细胞(一般顺利的话,形成sphere需要15~20天)。然后再扩大培养做其他实验。
( a" z! f6 P/ \) ^2. 现在肿瘤干细胞领域,寻找新的cell surface marker已经不是很好的方向了,况且大家也是半信不信的。我觉得做点耐药性或者生物学性质方面更有意义。
% j5 z* X3 ]) Y, G3. 针对染菌的事情,你必须和老板商量,统一除一次菌,然后未经严格消毒程序不能进入细胞培养间。因为做CSC折腾细胞的周期比较长,所以一定要保持无菌环境,否则基本上不可能成功。: G$ s) f3 X0 Z# d: ^$ \
4. 生物实验本来就很让人frustration,所以我一直就觉得做生物出身的,如果能忍耐下去,真的是没有过不去的坎。; R$ U% ]* R4 z; Y' c* [; _
* `4 z5 j* _3 k9 W$ g( A0 g Kbless~~ |
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