原代细胞冻存技术

morning860

回复 10# deron
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9 w9 l- `7 j& g8 w. [( M& J: t
* O9 i' _4 [6 X; O  a    如果不像你们一样对培养液进行预冷，而只是等所有的成分都加到一起后按温度梯度降温，那么是否加入DMSO和培养基血清的顺序就不用那么在意了呢？

deron

回复 11# morning860 1 @; L6 I  ?7 X1 @: I0 j/ d

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    即使用程控降温仪，初始温度也不应高于10摄氏度。DMSO在常温下对细胞活性影响很大。而稀释DMSO的步骤本身就是一个大量放热的过程，所以建议先配好冻存液，4摄氏度保存。现用现加

morning860

回复 12# deron ! ]: j* a) H1 J1 r6 r- @' v( z! W
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3 g. I/ T. E3 u0 u; F    我们做的时候是把DMSO与血清1：4加到每个冻存管，然后再加等份的培养基细胞悬浮液，每个冻存管里加的液体总体积为1ml，体积比较少散热应该快些，但是也是在室温下操作的。。。不知道会不会有影响，刚冻了不久。。

deron

回复 13# morning860
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8 v, N' D% q3 ?    据说DMSO在十几度的时候对细胞的毒作用很大，不过我们没有试过成活率。猜测影响会有一些，但不大。
0 q1 @1 R3 ^9 \   记得是先加入血清，再加入DMSO即可。我经历过一次把血清往DMSO中加，结果整管液体立马变成棕灰色——我想是血清中的蛋白热变性了

morning860

回复 14# deron % y/ [* S7 H4 ~8 u9 j7 d- E& i

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/ P: R; ^. @: c8 r) w    成活率等到时我复苏的时候就知道了，至于加的顺序以前真没在意，但我特意看了下冻存管里液体的颜色，我记得是正常的，希望不要杯具了。。。

afei198520

DMSO只要控制在一定浓度以下就不会对细胞造成损伤了。
% p3 C9 N6 ^' u+ K  Y  L冻存管爆裂的事情我们实验室还真的从来没有发生过呢。

277951986

我们实验室都是用DMSO:血清：培养基=2:1:7，混匀后，直接用棉花包住，再装进一次性手套的手指里面，直接放-80度，过夜后就可放入液氮内。比从4度到-20度再到-80度冻的细胞活性药好很多。

show0ji3

个人认为，最好别用内旋的，容易爆瓶，另一个容易在解冻的时候污染。

qzx_everything

谢谢啦