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楼主: yangzeqian
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[请教] 请教关于脐带组织贴壁法,如何提高原代细胞的数量。     [复制链接]

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发表于 2017-11-15 10:44 |只看该作者
回复 yangzeqian 的帖子
$ N: P& S0 \: P- A* B8 i) n9 z
+ D& ]. I7 S% p% G这倒是个不错的数据,我也做过好几次平行试验,一份脐带种两瓶,一瓶贴撕下来剪碎的华通氏胶,一瓶贴不撕直接剪的脐带组织,结果后者都会有一定程度的上皮细胞爬出来,对于传代时候的消化程度、间充干收集量以及传代完后的细胞状态都有影响。

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发表于 2017-11-15 11:42 |只看该作者
回复 santry 的帖子
. Z% k, G- o% u0 H8 ?
  H9 w* B; g* N. E5 B不知道是否试剂的影响,带羊膜贴壁上皮细胞在我的实验中爬出来的几率很小。间充质会在大约9-10天这个特定的时间段集中爬出迅速增值,实验传代也没有问题,很稳定。最近实验室让只取华通氏胶进行贴壁,细胞的状态以及爬出的时间反而不如以前。

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发表于 2017-11-15 11:43 |只看该作者
回复 santry 的帖子6 m" H& z! l9 R- S

+ `7 [  `2 @9 W这个是。感谢回复
2 s6 p4 F* ?# h' `! U

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发表于 2017-11-15 13:08 |只看该作者
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学习了 正好最近才看了这方面资料

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发表于 2017-11-15 14:48 |只看该作者
1、剥离脐带的1根静脉和2根动脉后,撕扯华通氏胶;脐带的表皮(也叫羊膜)一定要除掉,否则细胞不纯;
7 ~! O( {, |2 [4 q- Y, |2、华通氏胶撕下来后,用剪刀剪脐带组织剪成1-3mm3大小,用少量培养基贴壁培养。

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发表于 2017-11-16 12:19 |只看该作者
回复 yqw1996 的帖子
# p, K5 t9 P; P) |0 V+ H+ B! F
$ x3 `9 O$ e" i. p# [有时间可以多探讨

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发表于 2017-11-16 12:22 |只看该作者
回复 yanxm920 的帖子
- U3 r. O  q1 g# k3 M' e6 ?& R: w  W* c1 v0 K) |3 [8 {( u
恩,感谢解答。

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发表于 2017-11-28 09:18 |只看该作者
所有的对照试验都要控制好变量才有意义,你是不是用的同一根脐带做的对照试验?甚至再严谨一点,应该用同一根脐带的同一部位去做这个对照。因为不同脐带之间,同一脐带的不同部位之间,细胞的含量还是有一定区别的。据我的经验,去不去除表皮对细胞爬出速度影响不大,不去除表皮的话细胞纯度相对会低一点。

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发表于 2017-11-30 10:13 |只看该作者
怎么样了?方法我有,就是没做过,请教讨论啊

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发表于 2017-12-1 09:56 |只看该作者
回复 yangzeqian 的帖子/ a  j: R/ |. h# r& `
  z+ q5 d2 d# o: S5 n9 j! R* h
不能光看细胞要数量,带羊膜会有上皮细胞长出来,而且上皮细胞生长速度要快于间充质,你可以把之前做出来的细胞做一个流氏分析,就知道了。
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