［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：
* Z. F) a4 Z- y' @' r* Q1 @1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）' T/ F/ a7 S, Q2 ?: E
2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？
1 b) H6 E9 |8 [7 V/ J  Y, I3 `3 h3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。0 a$ Y) p( D  i  H# F" i
求解～

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子! u6 x6 @/ d3 I6 r5 e

* c" p; ]& w* H0 c3 K! [主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子
' Z* y: `( I4 X# y; Y! r# g* y6 ~( m! g  O# W! n* V) `- F
我都是用吹的……

nailute1985

回复 醉心科研 的帖子6 Z* j' Z# ]3 f2 F
  n* J; l; x( f, u  _
嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就

nailute1985

回复 我是传奇 的帖子
) H8 O9 i. p/ X
* J* @' D0 m3 z/ o这个是我们boss给的protocol，3/28加的量和Il2的量据说是验证过的，您说的我每天都需要调整是什么意思？细胞密度么？前几天细胞基本上是不增殖的，细胞数就是那么多，但是培养基消耗很快，如果我按1:1或者1:3补液的话会不会细胞密度太低了不利于T细胞的生长呢？而且IL2我一般是补液的时候按照培养基体积再补充的，不是每天都往里面加。还有，因为我们是做的CD3/28的可溶性抗体，我期间换了一次液，那我换液之后还需要再刺激一下么？

nailute1985

回复 我是传奇 的帖子
, u3 C  a. e! `1 p- U+ {6 w  \1 V1 E) O4 Q( m  s  |7 m
也就是说CD3/28刺激一下就可以了，不需要持续的刺激？我们没加自体血清，我们用的HSA
3 d6 E  {7 t* v% M$ `+ a5 u/ M

nailute1985

回复 清如许231 的帖子
8 ^; w5 G  N/ C* u3 d6 w/ l7 X+ P! b: c0 l7 z+ L( A& n9 f: _% W
我们用的HSA，效果可能会更好吧

nailute1985

回复 lyj-0017 的帖子
$ f6 G) I' G5 ~
' |2 V# m+ p% `0 M- Z' F6 _T细胞扩增不需要干扰素的
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