小鼠脂肪干细胞传代后老化，原因？？？

zerollx

     最近一直在做小鼠脂肪干细胞的分离提取与培养，用的是6周龄的ICR雌鼠。步骤如下：
5 s* ~7 w4 m. |3 ?6 j     1、取腹股沟处脂肪组织，尽量去除可见的血管，用含300u青霉素、300ug硫酸链霉素双抗的DPBS洗涤3~4遍。6 s6 V- S, V# i+ d6 A
    2，充分剪碎，用0.1%的一型胶原酶37度振荡消化1h。! o7 p, ]. b% W% E# k$ ]* W! X: P* j
    3、10%FBS的DMEM培养基灭活胶原酶，200目尼龙纱布过筛。9 H2 m7 N" I9 o- g8 O& J
    4、10%FBS的DMEM培养基洗涤3~4遍，含双抗，10%FBS、DMEM/F12培养基培养（0.5ml脂肪组织分离出的脂肪细胞置于一个35mm皿和60mm均做过），24h后换液。4 y- ?% V- T- m0 a
   5、每周换液2~3次，一般一周后长满，80%~90满时胰酶消化3~5min，1:2传代。
  q0 C" h; f# d" s4 R- }" f  原代时的状态很好，但是传一代后细胞就老化了，不知道大家有没有遇到这种情况，又是怎么解决的，诚请指点……

zerollx

回复 dc1055 的帖子
6 w4 a) w1 T, x% X6 I
5 h4 ]9 r6 z* M1:2传代后4天细胞都没有见到明显的增殖，而且死亡细胞数目逐渐增加，细胞间颗粒物质、碎屑增多，细胞边缘也粗糙了……

zerollx

回复 wnavy200299 的帖子
  e' w) `+ }2 q. G; Q  c- C. v  u# K1 a4 F+ q  w
鉴定细胞是否为ADSC，常常需要将其传到第三代再做进一步分析……

zerollx

你真有毅力啊！能否留下QQ或手机号，咱具体聊……

zerollx

回复 冠忠 的帖子  e6 H3 F$ l4 b+ H- a  @( Y

% V& n# Q" m- |4 A) Y能不能请问一下你加的是什么生长因子？

zerollx

: u1 Y0 m# ^1 l
# t' S. C5 N3 |7 \
回复 冠忠 的帖子
2 A" O* {9 r& g  |
6 M, ?2 U% A  k6 p嗯

zerollx

回复 翅膀111 的帖子) u2 t7 m/ M4 O& S& G5 C
) C* z  n; I  B+ X
你能传多少代了现在？

zerollx

回复 meister 的帖子: Q( G) b: A+ j: M

; d+ V% n3 B( H1 z. p* V9 }, m请问你有加Vc和bFGF的培养体系的相关文献么？