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标题: 羊膜上皮细胞培养 [打印本页]
作者: fuyinsheng    时间: 2014-8-29 09:33     标题: 羊膜上皮细胞培养

最近刚开始培养羊膜上皮细胞，发现随着培养代次的增加羊膜上皮细胞形态从鹅卵石状逐渐变为成纤维状，根据一篇文献描述，羊膜上皮细胞随着代次的增加上皮标志物的表达会下降，间充质标志物表达会上调，这倒是与实际培养情况相符。请问大家培养羊膜上皮细胞的时候都是会出现这种现象吗？8 p7 h# B0 I: T' y* e8 O  j- l+ j
P0 P1 P2 P3 + H+ ^$ }6 g2 l2 W6 L  C4 i/ m! }
培养基是DF12+10ng/mlEGF

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作者: fuyinsheng    时间: 2014-8-29 09:34

以上图片的细胞分别是P3  P2 P1  P0
作者: coffee.cat105    时间: 2014-8-29 09:39

我的也是耶，跟你的状态很像，但是你确定是羊膜上皮转化成间质细胞了吗？还是原代的间质细胞没去除掉？
; J' z/ O3 c! \2 j4 L5 `' ]
作者: 单个核细胞    时间: 2014-8-29 09:48

本帖最后由 单个核细胞 于 2014-8-29 09:49 编辑 7 P- d6 h7 c! ~1 c1 w/ [
4 \: U7 ?; h0 w
回复 fuyinsheng 的帖子, D! ~8 e  @/ j; h$ S# \2 N

! L) n, m: c% H: T- i& H+ R( W请看看我以前发的帖子。
' L% |# S& G& m4 a5 M: @5 d3 f+ ?9 S  _- _
人羊膜上皮细胞的分离、原代及传代培养8 a& |' G0 c# ]
http://www.stemcell8.cn/thread-72034-1-1.html
作者: fuyinsheng    时间: 2014-8-29 10:11

回复 coffee.cat105 的帖子4 L: H0 y9 E. b. D

8 u. l) P+ [; }. g: m$ A2 E其实我也在考虑是否是羊膜上皮细胞纯度问题，间充质细胞污染，但是从P2代图片来看又感觉细胞形态在发生变化
作者: fuyinsheng    时间: 2014-8-29 10:13

回复 单个核细胞 的帖子
6 [' s* v( v' v. L- {8 {" x" d3 v6 K, }" S! Q6 c2 t, P
感谢，通过你的帖子看来我这个应该也是由于间充质细胞优势生长导致的了
作者: fuyinsheng    时间: 2014-8-29 10:41

回复 coffee.cat105 的帖子* G" a: h% N* v! G: N- @

9 e# R. q8 A, E 2011 Changes in Culture Expanded Human Amniotic Epithelial.pdf (3.46 MB)
* z! C, U% u+ u0 t! F这篇文献认为羊膜上皮细胞培养到P4-P5代，羊膜上皮细胞标记物会下调，间充质干细胞标记物会上调，使羊膜上皮细胞向间充质干细胞形态转变。) s: h" E: n% u+ P+ J. E3 ~1 [3 K
但是考虑到确实很多人做的羊膜上皮细胞培养到P3代以后生长速度明显过于缓慢，所以我认为这会导致少量污染的间充质干细胞的优势生长，导致羊膜上皮细胞向间充质样转变的一种假现象，请大家讨论一下。

附件: [羊膜上皮细胞培养] 2011 Changes in Culture Expanded Human Amniotic Epithelial.pdf (2014-8-29 10:37, 3.46 MB) / 下载次数 36
http://stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NjM3MDl8NWM3NGI2N2R8MTcxODE1NjAxMnww
作者: ruofan1982    时间: 2014-8-29 14:43

我觉得应该是羊膜上皮细胞往间充质分化的可能性大。我曾经就遇到，在P3代传至P4代后，细胞形态完全变化。上面的那篇文献也支持转变这个观点。, p! H0 Y% W. B
, H7 [. n9 U* l8 P
如果是优势生长，不会这么明显的突变吧？
作者: 严杰    时间: 2014-8-31 12:29

在培养HEC时，悬浮细胞许多，SSE-4高；贴壁的细胞少，但镜下倒是贴满了，传代后SSE-4就越来越低。希望和大家交流
作者: 细胞海洋    时间: 2014-8-31 21:42

回复 fuyinsheng 的帖子( K6 n/ Z0 ~% u* U
, ~; X5 c: I6 v6 e2 i" B' D
建议你发新帖提问
作者: WeiTing    时间: 2014-9-6 17:34

有方法可以抑制羊膜间充质细胞的形态变为成纤维状吗？
作者: fuyinsheng    时间: 2014-9-9 09:23

回复 WeiTing 的帖子0 v7 _, @4 b5 L' A2 G# p  h

0 k, F9 n# Q. [: f# e, X7 |羊膜间充质干细胞形态应该就是成纤维状的，除非分化为其他细胞，表达其他细胞形态
作者: 刘慧瑾    时间: 2014-9-9 10:02

老化或者间充质生长优势。可以提高羊膜干细胞的初始密度，会更好



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