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标题: 求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法 [打印本页]

作者: jc_484 时间: 2014-2-27 10:26 标题: 求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

作者: 孙帅帅 时间: 2014-2-27 13:37

本帖最后由细胞海洋于 2014-2-28 10:03 编辑 ( T; f3 w& a6 p

如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

作者: 不倒翁 时间: 2014-2-27 13:48

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/ {! |9 O9 y, }6 G4 O* d5 B5 J
小鼠用EDTA？

作者: fuyinsheng 时间: 2014-2-27 13:49

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方7 b, o8 ^# H- `1 B+ h
培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）* F5 T- u1 g3 ]- z. [- ^
消化用0.25%胰酶消化4min

作者: wbj1983 时间: 2014-2-27 14:39

回复 jc_484 的帖子' _8 c. V# b1 e2 G
( Y8 Z6 c1 i& v2 E4 d3 A
基础培养液：knockout DMEM6 D3 \5 F/ h7 |3 E5 C7 y
FBS:20%* q3 F9 B* X; X) _' n
NEAA, J* W. e4 w4 R4 @1 N! E" z" \
Glutamin9 }( o: \) {) g( _1 a: Q- x
b-巯基乙醇
LIF:1000IU/ML) ^' j+ z7 ^+ h' q

消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

作者: 孙帅帅 时间: 2014-2-28 13:28

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: G; u( Z8 p* j
看错了还以为是人的HES呢

作者: Serene 时间: 2014-4-22 14:01

回复 jc_484 的帖子

DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF. ]- F3 S- g" O: I
这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF/ f" {9 l& x" p( c4 y) I
0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，

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