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标题:
脐带间充质干细胞培养问题
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作者:
shuimochunlan
时间:
2013-7-22 14:45
标题:
脐带间充质干细胞培养问题
请教,都知道在脐带间充质干细胞的传代培养中,需要消化后吹打均匀传代,才能生长的好点,我们在吹打的过程中,总是遇到细胞成片脱落,形成膜状,较难吹打均匀,请问造成这种现象的原因是什么?是因为消化时间太短?酶浓度不够还是别的什么原因?怎么解决?(我们是用的0.05%胰酶,消化3-5分钟,在培养箱内消化的)
作者:
bj123
时间:
2013-7-22 15:39
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shuimochunlan
的帖子
8 @6 N, K% n! R
0 S7 W8 q3 x/ Q
消化时间太长,导致DNA裂解。
作者:
lady
时间:
2013-7-22 17:58
额 木有遇到过。 我们都是稍微变形,就开始吹打。。。木有消化那么长时间...
作者:
ytumuyangren
时间:
2013-7-22 18:32
成膜片状,应该是你的细胞长过了,MSC如果培养时间太长,会长成膜片状,这样在消化的时,得到的就是膜片状。所以楼主可以在细胞长至70-80%,开始消化进行后续试验,
作者:
shuimochunlan
时间:
2013-7-23 08:49
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ytumuyangren
的帖子
* p5 {' p2 |8 z; u* t" b
6 _& E1 {6 a* A! P8 Q3 m& H" c
我觉得可能是生长过了,我们培养的是养了两天,第三天就开始传代了,要是这样也生长过的话我们就要培养一天半就要传代了
作者:
shuimochunlan
时间:
2013-7-23 08:50
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lady
的帖子
2 i& x9 N/ B8 T
# z3 n$ _2 x! [6 t' z5 {9 _ C
我们也观察的,时间只是预定的而已,不会是消化时间长了
作者:
CELL007
时间:
2013-7-23 14:31
可能传代密度高吧。
作者:
三月桂花香
时间:
2013-7-23 14:37
传代密度过高?导致细胞长得太密了吧,消化的时间是不是稍微可以缩短点,我们用的是0.125%四分钟,传代接种是到达78-80%漂浮就传代。
作者:
shuimochunlan
时间:
2013-7-23 16:36
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三月桂花香
的帖子
2 o w' ~$ e( |5 m/ c* y0 C
+ Z4 o; K$ E5 v2 K9 g3 E1 V
这个是很有可能的,下次考虑两点,一,降低传代时的接种密度,现在是一传二,可以考虑更改为一传三;二,密度不变的情况下考虑缩短培养时间。
作者:
shuimochunlan
时间:
2013-7-23 16:40
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shuimochunlan
的帖子
3 |: r6 V/ I' ] ~ e
, H( ~5 `; ?# G. I0 x9 B0 q
细胞长成膜状对细胞的损害到底有多大呢?除了造成细胞过早衰老还有什么危害?
1 O& @) A" s: [8 @
作者:
a565170383
时间:
2013-7-26 20:39
胰酶0.125%培养瓶内消化2分钟OK
作者:
xiangxu
时间:
2013-8-6 15:35
消化不完全,物理吹打的结果!
, f& \) R5 @& Y2 q
用0.25%的胰酶(加EDTA)消化,10分钟以内即可。
作者:
风信子deon
时间:
2013-10-25 17:25
刚刚入门,学习下
作者:
cjq12862
时间:
2013-11-8 15:52
考虑两点:
, l9 _" X8 D0 {; p% g
1、是否细胞培养时间过长;
! ^7 ?' u, h: r$ E) D @4 c
2、是否存在污染。
作者:
小样
时间:
2014-4-17 10:22
细胞消化食呈片脱落,可同一代次为什么也会出现?有的呈片有的呈沙状脱落呢?求高人指点。有人说因为细胞密度过大,有人说消化时间长,到底是什么原因呢???
作者:
细胞海洋
时间:
2014-4-18 10:11
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小样
的帖子
0 B: S' F0 M0 X9 s; [" c2 x. _
: K. b2 G) w. U0 ^6 n( j
建议你发新帖提问
作者:
小样
时间:
2014-5-8 15:13
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细胞海洋
的帖子
. K* x9 H* |! h! w0 d9 ~$ ?1 D: p# I. A
, b( C' b# a. Q1 P
恩恩,谢谢
作者:
309208770
时间:
2015-3-23 14:01
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shuimochunlan
的帖子
% O) p0 \( n8 @# b* T
. l4 z, G/ Y4 A* [% h1 y5 Q
细胞长成膜状,是长得太满,消化时不容易成单个细胞消化,培养传代时这样的细胞不容易贴壁
作者:
维维睡啦
时间:
2015-3-23 16:06
原因:你的细胞长过了,没有及时对细胞进行处理造成的。细胞融合率高,细胞排列过于紧密,细胞与细胞之间粘连结实。消化时,细胞成块脱落,粘在一起形成膜状,消化的时间再长也是没用的,反而会伤害细胞。不过这种现象可以继续传代,传代比例可以稍微加大。
; f) x; K3 V! z) I
解决方法
0 s# q) P2 ^6 T
1、以后培养时,细胞融合率达到80%左右即传代。
! s: R) A* b2 Q: Y: W
2、加大传代比例。
0 D3 |0 `4 C& M u3 q: W
3、适当减短细胞培养周期。
2 I. v- g2 l9 ?
4、养成经常观察细胞长势的良好习惯,及时对细胞进行处理。
作者:
neng172
时间:
2015-3-31 09:25
1、细胞长的太满的,下次长满80%左右就要传达了
' g% c. i V6 A/ ?
2、或者改用0.25%的胰酶消化
作者:
龘龘
时间:
2015-8-3 00:36
首先,应该是长过了,其次,你的消化液浓度较低,导致消化时间偏长,把消化液浓度提升到0.1左右,这样你就不需要在培养箱中消化了,尽量减少消化时间,消化过程对细胞有伤害的。
作者:
蚂蚁上树
时间:
2016-2-26 14:57
本帖最后由 蚂蚁上树 于 2016-2-26 14:58 编辑
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, \0 h' ?/ E$ L
消化时,细胞成片掉下一般是细胞长过了,建议根据细胞生长速度估计传代时间,一般间充质干细胞状态比较好的话,要尽早传代,还有就是胰酶的浓度是不是太低了,我们一般都是用0.25%胰酶消化,脐带间充质两分钟消化就差不多了。
作者:
13153546906
时间:
2016-8-12 14:04
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xiangxu
的帖子
# Y' ?5 Q! J* P8 I' {; Z4 m8 I# w
1 F- b$ R8 I1 P" P: K- o
这么高的浓度,应该1-2分钟就可以了吧
2 {: G/ @6 H$ R& y
作者:
13710232281
时间:
2016-8-26 17:01
我听过说养间充质干细胞,宁可消化不充分,也不能过度消化
作者:
winstonsee
时间:
2016-9-30 15:12
传代密度过高、胰酶消化时间过长都是原因吧,刚开始做的建议在显微镜下观察,接种密度和消化时间对细胞的生长都很重要,接种密度过密导致生长抑制甚至分化,过稀导致生长缓慢甚至老化,胰酶消化时间过长会导致细胞损伤,影响细胞的生长
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