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标题: 您好我最近在做间充质干细胞诱导分化为成骨细胞和成脂细胞 [打印本页]

作者: 634996425 时间: 2012-7-1 17:56 标题: 您好我最近在做间充质干细胞诱导分化为成骨细胞和成脂细胞

本帖最后由细胞海洋于 2012-7-1 22:50 编辑

您好！我最近在做间充质干细胞诱导分化为成骨细胞和成脂细胞，可以用vonkossa染色每次染色处理后都为土黄色，不是黑色，但是用茜素红染色却染上钙结节为红色，请问这是什么原因，许多报道说染色是黑色，请为那位好心人士提供一些相关的英文文献可以吗，谢谢您们了！

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-4 15:47

本帖最后由加拿大STEMCELL 于 2012-7-4 15:51 编辑   ^; f  M+ f3 k) w& T- a( m

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vonkossa染色和茜素红染色能检测成骨细胞，不能检测成脂细胞。成脂细胞可以用油红O染色检测。稍晚点我再贴两张图片，是使用我们公司的产品MesenCult-XF培养间充质干细胞之后，成脂细胞的染色图和用茜素红染色的成骨细胞。呃，我们用的不是vonkossa染色。 # {9 V" I* s" z6 ], p. @8 R3 d/ k
下面的链接，可以解释vonkossa染色和茜素红染色的不同：http://en.wikipedia.org/wiki/Von_Kossa_stain0 \6 d: C- l  D( C8 @: a* }
简而言之，vonkossa染色可以检测到骨质形成过程中的磷酸盐沉积物，而茜素红染色可以检测到钙沉积物。

至于颜色的不同，则与光源有关。紫外线可以引起强烈的反应，所以钙盐通常被染色成黑色。常规的60-100瓦灯泡引起的反应较弱，所以钙盐会被染成黑褐色。具体见如下链接： http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/von_kossa.htm
1 S  ]  R" l8 V) W( a. V9 r
下面这个链接可以看到vonkossa染色的图片。可以看到有些染色是土黄色，有些是黑色。
http://www.google.ca/search?q=vo ... w=1280&bih=863l
% I  W8 Q5 e, A$ E6 i3 V6 A
其实最重要的是，我们在做染色时一定要有阴性对照组和阳性对照组。这样才会有东西可以去做对比。希望回复对你有帮助。

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-5 11:26

本帖最后由加拿大STEMCELL 于 2012-7-5 11:27 编辑 ' z( @- `9 Q( k# k; p- `

回复 634996425 的帖子0 G4 ^; g9 I- J" ?( |) z7 Z8 n
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[attach]43893[/attach]6 @! \1 y3 n( R* `! z: I! G
图A是用油红O染色第1代MSC生成的成脂细胞；
图B是用茜素红染色的成骨细胞。6 A% k# Y4 i3 Y/ b
" B3 H7 p, [+ t% t* h
原文见附件。[attach]43894[/attach]

作者: bulu123 时间: 2012-7-5 19:02

成脂很漂亮

作者: 634996425 时间: 2012-7-5 19:21

谢谢您！给我有很大帮助

作者: 634996425 时间: 2012-7-8 23:12

请问为何没有培养到第14天，诱导的许多脂肪细胞都破裂了，使用低糖DMEM诱导液可以吗？每次用油红染色许多黑色浓染飘起，请问那些是杂质吗，是不是应该用乙醇洗后才可以看到脂滴，可是洗后即便看到脂滴也被冲洗掉了呀

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-11 11:05

回复 634996425 的帖子( {+ h0 @1 C9 a. N6 }- b3 X t
7 |! e6 L( d5 Z9 Y+ _) a! \1 W
请问你用的是自己的配方吗？是不是培养液的问题，看起来好像培养液不能提供很好的脂肪细胞分化环境，所以诱导的脂肪细胞都破裂了。你能说明下你用的是什么样的脂肪细胞分化培养基吗？说明越详细越好。( |$ c, u4 `% G& r/ p

另外，我们推荐你试一下成脂细胞添加物，做一个对照组。

如果脂肪细胞破裂了，那油红染色就不会粘附在细胞上，而会飘起来。相反，如果脂肪细胞是完整的，这种情况就不会发生了。所以解决这个问题的关键就是找到一个优化培养基，可以保证分化的效果很好。

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 14:19

回复加拿大STEMCELL 的帖子7 U* k$ ^* m: Q7 @+ _' g3 ]

我是参考国内外文献报道，根据多数人用此培养基，我才按照这种方法配制的，培养基主要是hyclone 的L-DMEM+10%FBS（hyclone)+1μM地米+50mM IBMX+10μg/ml Insulin,维持培养基用L-DMEM+10%FBS+10μg/ml Insulin.刚一开始我使用诱导培养基21天单一性诱导，每周换液2次，后来我用3+3,诱导-维持，4个循环，每次染色都能看到上浮被油红染色的脂肪滴，可是就是没法保持其在细胞内染色，很让我头痛，谢谢您能给予帮助

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 14:20

回复加拿大STEMCELL 的帖子9 C- g4 {& c2 }& `- i. V* n8 ?9 e3 U {8 ^

您好！我顺便想请问，您的成脂细胞添加物，除了上述的，还有什么

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-11 14:43

回复 634996425 的帖子

请问是哪篇文献呢？

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:34

Won-kon Kim ,Hyeyun Jung,Do-Hyung Kim,et al.Regulation of adipogenic differentiation byLAR tyrosine phosphatase in human mesenchymal stem cells and 3T3-L1 preadipocytes.Cell science.2009

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:35

回复加拿大STEMCELL 的帖子5 n% X) Q5 k& ~+ y( h2 l: p
9 V% }2 ]: M1 x1 @4 H9 @" e4 k
Won-kon Kim ,Hyeyun Jung,Do-Hyung Kim,et al.Regulation of adipogenic differentiation byLAR tyrosine phosphatase in human mesenchymal stem cells and 3T3-L1 preadipocytes.Cell science.2009

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:36

回复 634996425 的帖子' ^$ D4 i" `$ x" V

对了还要加100μM吲哚美辛

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:37

回复 634996425 的帖子6 N- \1 y R4 Y) t3 l

干细胞培养指南-裴雪涛出版的，也是这么写的

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:39

回复 634996425 的帖子0 E' O7 y" y- `! b) w* D
" I/ [! J6 f* S N
中文：2010年-低渗结合自然沉降法分离兔骨髓间充质干洗吧及其鉴定，也是这么说

作者: 634996425 时间: 2012-7-11 17:43

回复加拿大STEMCELL 的帖子

您好！可以帮忙把您的培养基成份告诉一下好吗，万分感激

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-12 13:01

634996425 发表于 2012-7-11 14:20
: e/ M e7 b) I& p( J回复加拿大STEMCELL 的帖子* s, K) [- P9 Y# b: ]( F3 [3 g" @. K
8 a' q7 c( e$ y; b* M; X0 M7 |2 Q
您好！我顺便想请问，您的成脂细胞添加物，除了上述的，还有什么

下面这个链接是我们公司间充质干细胞培养产品的册子，你可以看一下里面的内容，希望对你有所帮助。抱歉这是英文的，我们暂时还没有中文翻译版。但是如果有任何疑问，欢迎随时咨询。

http://www.stemcell.com/~/media/ ... 8367_mesencult.ashx

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-12 13:09

回复 634996425 的帖子9 h# s. x# ?7 J# N

1. 你的问题里说，后来用3+3，能具体说明下这是什么意思吗？) P: U% [" z! }# T1 T: I" C T* o
2. 你研究的是人还是小鼠呢？/ M, |3 m! W2 H: i9 ]: R
3. 你使用的是常规的FBS，还是经过了成脂细胞分化预筛选的呢？做间充质分化实验时，使用的是经过预筛选的FBS还是还是未经筛选的，对实验结果的影响是很大的。

作者: 634996425 时间: 2012-7-14 08:40

3+3,代表3天诱导3天维持，循环。我使用的是hyclone的血清，至于筛选没有，不清楚，与平时培养细胞的一样。可是这一点没有听人家说过，我想了解您公司具体的联系方式，以及您们的产品

作者: 634996425 时间: 2012-7-14 08:40

我做的是猪的，

作者: 634996425 时间: 2012-7-16 17:55

回复加拿大STEMCELL 的帖子8 W5 k9 M7 h$ r
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您好，我做骨髓间充质干细胞，做的不是神经干细胞，可是为何收到的是你们公司神经干细胞的材料啊。不过还是要谢谢您的。对了，我参加活动，怎么T恤还没有到啊

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-17 10:17

回复 634996425 的帖子- h6 b: e4 f! h1 q# l1 D

您好，您的问题我已经转给技术支持，收到回复后我会再与您联系。4 k3 L) F. g1 L/ R' k
请问您是否参加了挂图申请的活动呢？我们的同事在邮寄材料的时候会根据您填写的研究方向适当邮寄其他材料，您是否在之前的申请中申请过神经方面的挂图或信息呢？如果方便的话，可以留下您的电子邮件地址吗？我们会查找您的录入信息，针对您的研究领域做出相应调整。
此次抽奖活动不是每个参与的人都会收到T恤，第一轮活动在前三天就收到了超过500个申请，第二轮活动在第一周就收到了超过1000个申请，所以我们无法保证每个人都会收到T恤。但活动结束后，我们会抽取部分未中奖者，随机赠送一些小礼品，以感谢大家的支持和关注。

作者: 634996425 时间: 2012-7-18 16:58

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谢谢，您了！

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-7-23 17:34

回复 634996425 的帖子

您好，我们公司的产品可能不能满足您的要求。我们没有关于猪的产品。如果您有其他问题，欢迎随时提问。
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STEMCELL Technologies目前在北京设有代表处，欢迎您随时来电咨询。电话：010-6410 8515

作者: 634996425 时间: 2012-7-23 17:50

回复加拿大STEMCELL 的帖子0 e! J* @# C4 U( ^- W9 M& o4 j

[attach]44437[/attach][attach]44437[/attach]谢谢您了！如下是我诱导的脂肪细胞图，可是为何现在每次固定细胞形态都难以保全，我用的是中性福尔马林（10%福尔马林）

作者: 634996425 时间: 2012-7-23 17:51

回复加拿大STEMCELL 的帖子. h5 c1 \. p% B! ^3 S' d; x

并且每次油红染色效果都不好，我在用异丙醇溶解油红O配制为0.5%溶液，研磨接近1个小时，染色20min,固定30min ,结果还是不好

作者: 634996425 时间: 2012-8-4 11:58

回复加拿大STEMCELL 的帖子7 {8 ^0 f" R& X0 g
, r( U) A2 }9 L0 x* u; H
您好！谢谢您！您的礼品我已收到我的成脂细胞也已经诱导成功，只是时间的问题，我在诱导15天开始出现脂肪细胞，第十八天开始增多，如图

作者: 634996425 时间: 2012-8-4 12:00

回复加拿大STEMCELL 的帖子

希望多多交流

作者: 加拿大STEMCELL 时间: 2012-8-9 16:02

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4 e* n4 I/ U( c0 r2 Q4 s; J: M1 t
呵呵，太好了。恭喜恭喜！

作者: 生物狂人 时间: 2012-8-31 12:39

不知道IPS骨骺成骨细胞使之恢复至青春期可以不断分化的软骨状态是否可行，求解答

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