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标题: 人胎盘间充质干细胞问题？ [打印本页]

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-4 09:57 标题: 人胎盘间充质干细胞问题？

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

作者: grape 时间: 2012-6-4 13:54

本帖最后由 grape 于 2012-6-4 13:54 编辑
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回复 hhxxattxs123 的帖子: h8 T5 @8 h% A) s d
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组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。
还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。: Q$ ?, A/ B3 A9 ?* f
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。9 V. `3 r1 i: `' l
我们一般用人脐带分离MSC。
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作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-4 14:14

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了
时间长了，怕组织细胞死亡。

作者: 单个核细胞 时间: 2012-6-12 10:55

回复 hhxxattxs123 的帖子) `- z7 p9 Y9 e% A  X5 E+ n
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你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。
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参考帖子：
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html( {! |! a+ q1 h) p) k+ q
请教华通氏胶的剥离：* W$ {' Q% b* ?6 S8 e6 J0 d# u
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：" M5 C; k3 }7 U
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
脐带间充质胶质的备置：/ A, i2 t: K' n- C6 g1 |0 ?
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html) J' ?0 X+ c7 [5 X3 q
脐带间充质贴壁法到底几天换液：. z6 S$ }/ B- \; J1 j4 s
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html$ y' s+ a  W2 A9 Y0 b3 i% i; l
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参考文献：) ^9 ]; t+ g) N  f6 z& I4 p
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作者: 单个核细胞 时间: 2012-6-12 11:01

本帖最后由单个核细胞于 2012-6-12 11:02 编辑

回复 hhxxattxs123 的帖子4 c( @9 Z5 b/ K* b# m) {: M
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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。5 d; X# {; {% E% n" B$ G7 v5 L

羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

作者: xiaolong 时间: 2012-6-12 11:15

回复 hhxxattxs123 的帖子

20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-14 07:55

回复单个核细胞的帖子8 P7 l" l7 m6 G6 Y& B/ ~

非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

作者: 回到从前 时间: 2012-10-26 14:51

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上应该可以我们做过就是细胞比较杂

作者: sailree 时间: 2012-12-6 15:20

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

作者: 院士站 时间: 2012-12-12 09:05

是不是加液太多

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