干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求助，hiPS诱导EB逐渐消散! [打印本页]

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-25 14:58 标题: 求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。8 R+ f( W1 X: L8 U
3 t# }7 P0 X2 K% u4 S6 k3 G4 B% q
问题如下：
   1 EB逐渐脱落散开的原因？$ `, G+ t. J! ?; c* l) E0 D$ g" w5 l6 U
   2 如果是支原体污染，如何检测和去除？

               谢谢！

作者: bio-bin 时间: 2012-3-26 12:45

回复 ligangtiancai 的帖子

我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-26 18:16

回复 bio-bin 的帖子 Z$ z/ c, g9 o
/ |& [( l* j' ]" \' s7 J. W1 m
做EB时用的是MEF的培养基，高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

作者: jefferson 时间: 2012-3-27 14:31

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。1 ?& H; s3 b: B. G/ z" l v
, n, J" S5 P4 m0 a8 Z
另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-27 22:29

回复 jefferson 的帖子
, v. T, |' u! K+ T2 }7 |
恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

作者: jefferson 时间: 2012-3-28 09:14

回复 ligangtiancai 的帖子$ J0 z5 b. U- ^- z

GIBCO

作者: echoxy1020 时间: 2016-8-9 05:05

回复 jefferson 的帖子! c) v% ^3 L% C* F8 i2 s
: @7 K7 p7 F$ W
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

作者: wangxiang 时间: 2016-8-9 08:52

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn/)