- ]3 }+ L( L @ ^" ]2.4Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达 ( }: L3 H: \5 ~, z' v$ ?: r & z! q+ K9 V; v; a: `体外培养3周的细胞经实时荧光PCR检测显示，共培养组细胞的Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达明显高于AF细胞组及BMMSCs组（均P＜0.01，表2），且AF细胞组的表达量明显高于BMMSCs组（均P＜0.05）。表2Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达(8 i% t- r0 y6 H
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3讨论 6 S: l. e# n, h) a/ j& o 4 K% K9 _- N( x7 A( Z0 M' U椎间盘随着年龄的增加以及各种因素的影响而逐渐发生退行性变化。椎间盘退变的病理改变之一为AF的应力损伤,导致AF微断裂,使髓核突出。在椎间盘退变的早期，具有修复能力的AF细胞上调蛋白多糖和其它间质中的大分子，内部AF蛋白多糖含量的增加可在一定程度上弥补成人早期髓核蛋白多糖的下降［5］。退变晚期的椎间盘内细胞数量减少及功能受损，使得AF的自身修复能力下降，难以维持和修复自身的退变。此外椎间盘内细胞密度低，来源受限，使得通过简单的椎间盘细胞移植来修复AF存在困难。目前主要根据椎间盘退变的程度来决定修复策略，在退变晚期，椎间盘细胞代谢功能严重受损，已经不能够回应任何的生物学刺激，必须借助生物工程学以达到修复的目的。三维培养能够稳定椎间盘细胞的形状和结构，是维持细胞形态和表型所必需的。离心管培养是一种新而简单的培养椎间盘细胞的技术。这种三维培养只需要简单的离心，细胞团内相邻细胞间形成三维接触，有利于细胞外基质的合成［6］。分泌的细胞外基质使得细胞紧密地结合在一起，形成细胞与细胞间的接触，模拟椎间盘内的环境，有利于细胞团内的细胞维持天然的表型。细胞团在最初的2周内显著长大，3周后趋于稳定，达到最大尺寸。细胞团体积的增大是由于细胞外基质的合成及细胞的增殖，之后体积不再增大与通往细胞团中心的营养通道下降有关。 0 I$ S8 W" e, _2 r. e, a6 R / z6 G4 U1 c/ G3 x$ ZBMMSCs具有以下特点：取材方便且对机体无害；由它诱导而来的组织在进行移植时不存在组织配型及免疫排斥的问题；它可以向多种组织类型分化，在体外可大量培养扩增；转入外源性基因后不影响其特性［3］。因此，BMMSCs成为骨组织工程理想的种子细胞，在治疗椎间盘退化方面取得了实质性的进展。本研究我们测试BMMSCs是否能够调整AF细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成，是否可用于治疗或延缓椎间盘退变。髓核细胞在椎间盘退变过程中逐渐消失，因此在体内BMMSCs主要作用于AF细胞，而且获得大量有活性的髓核细胞相当困难，从而AF细胞成为修复椎间盘退变的靶向细胞［4］ 。椎间盘细胞与BMMSCs间及其细胞与细胞外基质间的相互作用机制尚不清楚，可能与细胞间缝隙连接及细胞因子等因素有关。Gruber等［7］证实了AF细胞间存在着缝隙连接，它的存在可以促进细胞的增殖及细胞外基质的分泌。Yamamoto等［8］证实了共培养模型中TGF-β1、IGF- 1、EGF、PDGF等含量明显增高，这些生长因子主要来自于BMMSCs，它们被证明可以促进椎间盘细胞的生长。" M* @9 h5 ?8 _% V1 m1 ]8 u6 A
7 E: s8 w7 q; T本研究中的离心管培养模型有利于BMMSCs与AF细胞间细胞因子的传递，有利于缝隙连接的形成，有利于细胞的增殖及细胞外基质的分泌，证明了体外共培养此两种细胞存在着可能性，且细胞团内的细胞维持着分泌细胞外蛋白多糖和Ⅱ型胶原的能力。本研究为进一步探索BMMSCs治疗椎间盘退变的可能性提供了证据。 $ u, z) U$ x" N/ U' D x 【参考文献】5 L' _" j8 a/ H, h& S& Z
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