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标题: 关于实验，一些失败和经历与大家分享 [打印本页]
作者: crystal    时间: 2010-11-22 22:42     标题: 关于实验，一些失败和经历与大家分享

首先知道自己要做什么，这很重要。我上个月15号出科开题，基本上这一个月的时间里，我在彷徨，绝望，无助，失落中挣扎。日夜无眠！
4 V6 C: [: K! f2 f- O% G" n' L
$ U  b, x8 \+ D# \2 ?' B因为什么都不懂，就连最简单基本的准备工作，都不会做。) I/ j8 {# I6 E0 E* u) u3 b4 a

3 w/ u, d1 s+ N( j- j. m8 ~后来上网查文献，同时也认识了一些朋友，尤其要感谢干细胞之家的一些朋友，给了我很多资料，不厌其烦的帮助我，深表谢意！
0 }  U$ j8 ?" }8 `, @3 N
1 @- Q: l0 }2 @5 ?; K1 a( i实验开始时，要拟一个详细的步骤出来，每一步都要写清楚，以及实验所需要的材料等，不要像我，细胞都要传代了，才发现培养瓶还没泡酸消毒，想要提质粒了，不是差这个就是差那个，连一个烧瓶都搞错，我实验需要的是三角烧瓶，可材料商给我拿来的是普通烧瓶，一看傻眼了，后来仔细想想，的确没有说三角这两个字。好在东西也不贵！; b1 @, ?# w' `0 C+ O

4 B% \# r& @) @* e( Q9 E. {  h我认为每天都应该有一个计划，比如明天我要传代，那我今天就得应该泡酸的泡酸，消毒的消毒，每一步都要有条不紊，中间若有一步接不上，实验就只有停工！% L" O! R7 l' a+ D+ P( k& W9 \% q+ Q

/ X) m0 A5 \' p5 q8 j9 w4 C' k多和师兄师姐们交流，很重要，因为他们是过来人，有过失败的经历，若是可以和你分享，会有很大帮助！! H0 I9 `' [( p4 ]1 ^, k0 C6 w; i0 X
/ h& p- B: x5 {) M
细节决定实验命运：我今天泡酸的时候，瓶口向上，排列好，吸管用绳子拴好，我也做到了，可外面鱼网我却在很高的地方打了个结，错！应该在瓶子近端打结，打紧，使其固定不要太活动。放下去能听到咕咚咕咚的声音，证明酸液进瓶子里了，并且全部装满后将没有以上这种响声。/ u/ G. l) G3 V$ K1 O! k

, f  ?6 o" {' |1 d, C$ B: l我今天就是因为没扎紧，所以一下去，瓶子全在上面飘浮，我那个急啊，跑外面找了一根棍子，打算一个一个的按，把它们全按酸水里面！可怎么样都不行，后来还是同学来帮我把网重新拴了下，才可以了。
2 f: H5 D8 l& k3 a6 n0 W2 z5 E! r
$ C  r6 d2 f" Z- B太晚了，明天接着写，本来拍了些图片，可接到电脑上来一个不小心全删完了，气死我了~！
作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:13

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:16 编辑
# T! B$ Z( K& `+ B  \7 Q) ^  J6 T- r& X2 e# ^0 c/ A
[img][/img][url][/url]我的柜子，因为在桌子下，整理得蹲下去，那会真想自己不要长这么高就好了！累死我了，不过看着这么整齐，也很开心的哦！

图片附件: １１.jpg (2010-11-23 21:14, 29.42 KB) / 下载次数 472
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:17

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:20 编辑 6 @. D4 z5 m6 Q  J( L/ D+ J

( X  T/ m  z, r( t1 G[img][/img]这种吸管，有的同学喜欢用一次性的，也不贵，2毛钱一根，我问了好几个同学，都说一次性的是挺方便的，可容易污染。我仔细看了论坛里的一个细胞培养的视频，人家科学家们也是用玻璃的，我觉得也许也有道理，不知道大家用的是那种呢？个人认为玻璃的其实手感好些！

图片附件: ２２.jpg (2010-11-23 21:17, 19.49 KB) / 下载次数 493
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:21

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:32 编辑
; P$ O) s2 j+ |' l. t7 Z6 e
. U1 v1 F  b% F' {( [[img][/img]顶部接压力头的地方，填点棉，填的时候不能太紧，太紧了没空间负压上不来，吸不上来液体的哦！我今天不小心填太进去了，急死我了，很想吹两口仙气吹出来，后来用针头才捣了出来！可有的人也没有填这个的，我师姐说，填了棉万一吸力太大了，也只是把棉打湿！

图片附件: ５５.jpg (2010-11-23 21:28, 14.58 KB) / 下载次数 476
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:21

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:26 编辑 1 A0 H' |& e9 {. J/ V% z! U  R. u
% i8 ^! V9 m! Z
[img][/img]我有的同学是直接放里面消毒，没有在外面卷纸，但我师姐说外面卷层纸会好些，减少污染的机会!可别小看卷这个纸，我上次自己包的时候就整反了，吸管顶部先包，结果用的时候就变马吸头先出来，一不小心就碰到吸头了，那肯定是不行的，污染了也不能用了！今天自己反复的包了几根，细节细节，看似一个很小的地方，关系大着啊！

图片附件: ３３.jpg (2010-11-23 21:22, 25.85 KB) / 下载次数 497
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:26

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:27 编辑
8 d$ }3 a; |/ @  K. r: ^5 N. D) g
& `2 W* C( F4 J[img][/img]如图所示，吸头先去，再拿出来用的时候，也最后出来，手也就不会碰到了！

图片附件: ４４.jpg (2010-11-23 21:26, 23.72 KB) / 下载次数 458
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:32

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:34 编辑
& M$ C* W  d3 T4 U% U9 A
% l+ u  h5 q1 p  o' T; R+ @[img][/img]每次包的时候，先一次性的把棉先填完，如果你包一根填一根，有时候不自觉的会忘记填棉这一步！

图片附件: ６６.jpg (2010-11-23 21:32, 27.71 KB) / 下载次数 449
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:34

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:36 编辑 / m+ p2 O3 J/ Z! i
" A* e) |4 g8 b5 N- y
[img][/img]培养瓶消毒的时候，底下要垫一层纱布，面上也要放一层，这样可以防止玻璃爆炸，我同学说的哈！

图片附件: ７７.jpg (2010-11-23 21:34, 26.42 KB) / 下载次数 470
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作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:47 编辑
" O5 S/ v- b; q  |/ W
9 ^- G  @* _  X6 i本来今天要分装血清的，可昨天忘记把双抗和血清拿出来解冻了，只有明天再说了！听同学们都说血清双抗如果反复的拿出来解冻，效果会没这么好，不知道是不是这样的！
作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-23 21:40 编辑
* A2 S, @# x! W6 Q. Z% w$ O- R) m+ F" \4 B4 D! b" B
[img][/img]最后打包，不一定要打成一朵花一般漂亮，但一定要打紧，上次一同学没打紧，结果走到半路，全散了，玻璃全打烂了，哭死她了！贴标签这个很简单应该不用说了的！

图片附件: ８８.jpg (2010-11-23 21:37, 15.26 KB) / 下载次数 490
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作者: scienese    时间: 2010-11-23 21:43

lz说的很好
作者: suxiaomei    时间: 2010-11-23 21:46

呵呵 辛苦LZ 祝愿LZ的科研越做越成熟
作者: crystal    时间: 2010-11-23 21:57

呵呵 辛苦LZ 祝愿LZ的科研越做越成熟
+ h( w4 b/ G) v* psuxiaomei 发表于 2010-11-23 21:46
$ g/ U, A' s+ Y" U& V! `/ K
, A6 z: R* w; h& l' O3 P

2 u2 w! I0 t5 D9 i4 J+ B    好惭愧哦！科研这词我望尘莫及呐！
作者: sunsong7    时间: 2010-11-23 22:09

很不错，大家鼓励一下！
作者: siyue13    时间: 2010-11-23 22:15

C医生,你OUT了,我们都用一次性的,那种玻璃的,好久不用了
作者: marrowstem    时间: 2010-11-23 22:27

预祝实验顺利。
作者: crystal    时间: 2010-11-23 22:31

C医生,你OUT了,我们都用一次性的,那种玻璃的,好久不用了* `% X- H  S) F8 |5 [4 z: T
siyue13 发表于 2010-11-23 22:15

8 ~  X; P- R- F$ x: ~! v4 P  F! `  @8 I% U7 z7 S6 r4 \! v

" g) O+ u5 y) S! m3 t  b    好打击人哦！那些东西都是我继承我师姐师兄们的遗产！她们说一次性的有的容易漏气会污染啊？是不是真这样嘛！真是的，各说各有理！
作者: crystal    时间: 2010-11-23 22:33

预祝实验顺利。- |5 J) n" D: s# l* {& g0 P' p
marrowstem 发表于 2010-11-23 22:27

" y3 g+ {0 n# D. g; K  G$ A0 G" x; ~# o

* o- ^$ M4 K" `% D  m    谢谢科学家前辈，你的鼻子真大！你的中文也很好啊！
作者: marrowstem    时间: 2010-11-23 22:49

回复 18# crystal
, t3 q1 t8 J& y, Q4 o# e1 m+ \7 g要申明的是那个头像不是我，而是我的偶像，克隆之父John Gurden 。
作者: crystal    时间: 2010-11-23 23:12

回复  crystal
3 @* r' T- `3 }要申明的是那个头像不是我，而是我的偶像，克隆之父John Gurden 。& `2 i. {8 _- n& o$ M& S; |- B
marrowstem 发表于 2010-11-23 22:49
! W. O# l+ H: R4 s' i; n9 M9 [1 p
1 M, \0 [( B' \( k8 G

: C$ g+ b1 s( R7 _) o    一直误会了当偶像般模拜了呢，原来不是啊！不过一样的强大哈！
作者: crystal    时间: 2010-11-23 23:25

很不错，大家鼓励一下！
/ K/ ]) \! S! f: b/ }1 q$ Dsunsong7 发表于 2010-11-23 22:09

# A1 P3 n) i$ ]. ?9 m  V0 H( `$ o/ i, F/ w4 L# i3 E4 D) T8 z2 o

5 P/ X2 Q( }6 X8 }2 k) M2 E    谢谢科学家前辈加的分！
作者: linlicau    时间: 2010-11-24 07:30

不错，加油！
作者: wky98    时间: 2010-11-24 11:00

一次性的进口吸管（CORNIG）贵，不过还没碰过漏气的，包装还好。不过有一次看到有一根吸管明显不是干净的，所以有时进口的也还是要注意点。国产的包装就差了，我们买的国产培养皿包装就容易漏气，不能确保无菌
作者: crystal    时间: 2010-11-24 11:46

是啊，今天试着用一次性的吸管，感觉不太好用，做工好粗糙，有毛边！很容易刮到瓶里的细胞
作者: deron    时间: 2010-11-24 16:41

万事开头难，楼主加油吧
作者: suxiaomei    时间: 2010-11-24 18:36

回复 13# crystal
% u& }8 c  M, |- ~0 P3 W2 Y* @% T
; g- V4 Z: T) K' F5 I! m
4 L5 V4 s1 L! ]( |! ?. {    呵呵 或许LZ对科研这词有更深刻到位的理解么。
作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:02

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:08 编辑 9 T. T! o% {2 G' j- z9 t# U
回复  crystal % u, v# G3 K. ]. V

% e$ D" _0 _; _4 P4 F% P$ {$ [1 V
    呵呵 或许LZ对科研这词有更深刻到位的理解么。- Q5 v" F  Z: |* `
suxiaomei 发表于 2010-11-24 18:36
5 r0 P& x+ o( q: y9 e9 x

: v+ b2 d' J2 @& }8 R( Z" R2 I  {我觉得科研应该是很高深很神秘的吧！所以从小就很崇拜科学家！+ \1 ?" n& I) m: t! w
从小就很好奇很多东西，几岁的时候就把爸爸的新手表打开来研究过，很喜欢给乒乓球打针，看它还跳不跳！
) y7 I8 Q+ o. M% U: n% l. m0 z9 x家里的空针，那个时候还没有一次性的，玻璃那种，很喜欢给鸡打水针！事实证明了现在的注水肉注水鸡，我是多么的有先见之明啊！
- T9 |- O$ ~; o( Q: I4 H8 h: g还有很多很多，为此没少挨骂，一个萌芽中的科学家苗子，就这样被埋没了！
作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:30

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:33 编辑 & V9 X! S. d. ?$ w- J  H
! S3 r5 o2 V+ U4 E9 z' i$ @
[img][/img]如果可能，就把盒子能呈现在眼前的几个方向都写上名字，方便自己找，也能让别人一看就知道不是自己的！因为我就亲眼看到一个同学，打开了好几个盒子才找到自己的！有没有污染就很难说喽！

图片附件: 1.jpg (2010-11-24 19:30, 20.03 KB) / 下载次数 148
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:33

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:35 编辑 - y# x' `, f0 W' d: n* [9 v( Y

3 U" \* Y# l& `% Q  A7 l: w[img][/img]实验室的同学们用过的玻璃吸管啊血清瓶培养瓶等等，有的人用洗衣粉泡，有的人用清水泡，不知道大家用什么泡呢？我第一次用洗衣粉泡，倒了很多粉进去，后来把我洗安逸了！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:39 编辑 2 ~* \7 L: r( M8 t

* G( J& y: q: t, a, F; K[img][/img]昨天下午拿出来解冻的血清，上午本来想分装的，可还没完全融化完，只有等到下午了，所以以后记得了，时间要算好要安排好！

图片附件: 3.jpg (2010-11-24 19:37, 12.45 KB) / 下载次数 144
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:41 编辑
# `$ I4 T& |( @* L. H: Z
9 n1 y1 t& g& }- e& \4 Q& D[img][/img]我们实验室一共有两个冰箱，里面摆满了每个人的东西，我打算这两天去买个盒子，把放4度的东西全装在盒子里，写上名字，这样一来，别的同学拿东西的时候就不要总是碰来碰去的，不舒服！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:45 编辑
# K! n/ I3 {. ^9 g% v8 z& Q/ f, }8 [/ b
[img][/img]实验室的同学，做免疫组化的，在清洗载玻片，也是很精细的操作，不一个小心，玻片就碎了！所以一般这个时候我都不会和他讲话，不然他整个一瓶都没了！

图片附件: 5.jpg (2010-11-24 19:42, 10.75 KB) / 下载次数 175
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:48 编辑
& g' `2 R1 F9 s0 ?7 l6 ~9 J6 v3 N/ V$ P6 A/ K9 S- `( L9 {
[img][/img]我的HELA，本来昨天就应该换液的，但是我应该消毒的没消，应该配的也没配，当时也没想到把别个同学的拿来用下，好在她命够大，今天都还活得好好的！所以说--------永生的海拉！并非虚名！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:53 编辑
4 N1 z- E3 M/ U4 T
7 _7 ]5 {2 o2 S[img][/img]还是刚才那同学，河南的，挺可爱的，我来实验室一个月了，就看他换过一次衣服，其中一条裤子屁股的地方还被钉子挂了一个洞，这么冷的天，透风的也不冷嗦，汗！不过总是很热心的帮助我！谢谢！人也节约得要命，人家96孔版都要泡酸消毒反复用的！并且总是对我说：科学要严谨啊！！！！！！！！, A6 ]/ E' y$ s- G7 K. h
有几个长得挺帅的同学今天没碰到！

图片附件: 6.jpg (2010-11-24 19:48, 20.3 KB) / 下载次数 171
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:36

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:55 编辑 1 ?2 `7 W) _3 `3 O8 k
' {/ i) L! z- P$ |( I) i
[img][/img]培养基都很黄了，大家可别学我啊!因为我的海拉生命力超强！

图片附件: 8.jpg (2010-11-24 19:54, 20.29 KB) / 下载次数 183
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:37

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:57 编辑 / Y% D. s2 o6 M

9 e5 S" a& ^; c! G6 O$ X+ B4 f[img][/img]以前传代都从没离心，今天试着离来看，800转4分钟！有同学说每次都离心，对细胞损伤大，可有的同学说，离心了以后细胞质量高些！不知道听谁的好，只有自己试着摸索喽！

图片附件: 9.jpg (2010-11-24 19:55, 12.08 KB) / 下载次数 177
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:37

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 19:59 编辑
: o  [6 R; X1 d: X( `9 l+ b3 b/ a8 u3 a! ]$ g0 U! Q7 b
[img][/img]因为自己的培养基用完了，用别个同学的，和我的一样都是1640，可不知道为什么我的颜色带紫红，挺漂亮的，可他的就红色，难道是因为长相问题吗？

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:37

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:02 编辑 * T4 j$ T8 |, G% m3 w

9 h: Q% L/ x6 p& c% m% M[img][/img]我吹打细胞时，总是会有很多泡沫，不知道大家是不是也这样！边上这瓶就离心后的上清液，开始打算倒掉，后来一想，这也是培养基嘛，扔了也怪可惜的！于是把之前的几个空瓶子都再吹打了一遍，同学问我干嘛，我就洗瓶子水我养下看看能长出来不！

图片附件: 11.jpg (2010-11-24 19:59, 19.45 KB) / 下载次数 200
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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:37

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:04 编辑 " V! u& L+ j9 X. A& C
# b4 y1 v: i, \% j4 x- U8 E2 d
[img][/img]左边的四瓶是今天传代的，右边那瓶是上清液吹打原先的几个瓶子，反正试验嘛，就是试出来的撒，看看到时候那边的长得好些哦！大家猜猜看呢？

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 19:37

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:06 编辑
+ v( P9 O. t$ d' M; d- S1 G2 n. u% L
1 i/ G& v3 H. `' c* K7 W1 ?; e- G[img][/img]实验笔记，查文献先做好的记录，每一步都写上去了的！放在腿上，一边做一边看！尽量做到万无一失嘛！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 20:15

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:16 编辑
3 v! p2 N5 Q/ e2 e0 @" N5 ^7 G% J2 _: e# H; G
[img][/img]这就是上面提到的洗瓶子水，我亲爱的海拉，给了你这么丰富的营养一定要给我好好长哈！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 20:17

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:20 编辑
$ k4 C5 Y  v; Q$ g5 u
& e, O7 C- H( x/ H* O& d[img][/img]我分装的血清瓶，每个小瓶里装10毫升，之后冻存着，每次取一瓶出来配培养基就OK了！因为血清放在-20度里，每次拿出来解冻后也只取10毫升，反复这个操作的话，也许蛋白会变性吧！就像鲜肉买回来反复解冻后味道也不会那么好了一样！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 20:20

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:26 编辑
0 c- a& d- J4 L9 g' K$ }% J  f8 v  r
[img][/img]装好后瓶子用专用封口胶封好，统一放在一个袋子里，方便拿喽哦！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 20:21

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:25 编辑 4 i3 i# c" K3 L$ n

3 M2 I3 O. u! ~ 16.jpg [img][/img]双抗每次只加1毫升，一瓶要用很久很久，反复的拿出来又拿回去也不太好，我也分装成每安瓶10毫升，其实如果用EP管分装1毫升会更好些，每次就只用拿一管出来就可以了！可我今天没消毒！所以也只有将就了！这样如果自己用不完，以后留给师妹们她们也会挺开心的哦，虽然这个很便宜但有这份心思那感觉都不一样嘛！

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作者: crystal    时间: 2010-11-24 20:27

本帖最后由 crystal 于 2010-11-24 20:29 编辑
+ q% l* j% ]3 i2 _
2 {5 ~+ I1 y# E  g) a[img][/img]写上名字和日期，该放那放那去哦！做完这么多，都6点半了，外面的天都黑了，下着小雨，今天做了很多事情，好有意义哦！心情很好！

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作者: 皮搋子    时间: 2010-11-24 23:18

顶毒嘴小C一下！
作者: sunsong7    时间: 2010-11-25 16:40

633553573052087486a.jpg
2 b+ u4 c+ Y& a# ZLZ生日快乐！

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作者: wanghuantjmu    时间: 2010-11-25 19:53

前辈，吸取一下。
作者: 422521181    时间: 2010-11-25 20:09

路过  学习下
作者: 422521181    时间: 2010-11-25 20:10

路过 学习下
作者: barry    时间: 2010-11-25 21:39

继续努力哈，有兴趣就好
作者: huangcong1988    时间: 2011-12-12 20:19

不错不错，记录得很细心嘛，呵呵，加油，祝楼主实验顺利！不过还是建议LZ用corning的培养瓶（用来养细胞和分装血清用），那样要方便很多，玻璃瓶，真的是很不方便，泡酸啊，洗啊。。。各种不方便
作者: 都重复了呀啊    时间: 2011-12-13 16:10

楼主很急躁啊
作者: shashou_com    时间: 2012-1-30 10:28

现在都用一次性的啦，还泡酸。
作者: LQAI2012    时间: 2012-2-10 16:53

强烈同意 实验前做好准备工作是十分重要的~！！" x5 ]. u' {+ H& E# f: W, D( F6 W
预习或温习实验步骤！   准备试验材料！   预约实验仪器！1 {' i: `* R8 R& I& P; f
不然整个实验可能会因为其中一步的疏忽或延迟而得不到理想的结果 甚至导致失败……



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