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标题: 求助：细胞空泡化，生长停滞 [打印本页]
作者: 绿雪    时间: 2010-5-28 10:18     标题: 求助：细胞空泡化，生长停滞

请教各位：我的细胞之前好好的，但最近不知为什么老是长不了，而且细胞体积变得很大，中间好像被什么咬了，出现空泡，没有明显的核区，100倍镜下能见很多黑色的小颗粒，但培养液没浑浊，细胞也不会死，放置几天都一个样。烦请高手支招
作者: 细胞海洋    时间: 2010-5-28 14:44

建议上图
作者: cony    时间: 2010-5-28 20:59

改天再上传图。
作者: zsc78    时间: 2010-5-29 20:52

所谓的“黑胶虫”或支原体感染？还有就是细胞状态不好，死细胞过多也可以出现黑色颗粒。
作者: 绿雪    时间: 2010-5-30 23:33

本帖最后由 绿雪 于 2010-5-30 23:36 编辑
8 i4 g- d; Y2 Z/ m/ g* g9 A+ _( h6 F* o4 Y0 o1 t
这是100倍镜下的图片 这是100倍镜下的照片。

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作者: 绿雪    时间: 2010-5-30 23:38

本帖最后由 绿雪 于 2010-5-30 23:39 编辑
) y1 \* O5 f% {+ N9 u% @+ s% j5 D1 r# L/ b/ T
2010-5-29 PEF(5-26复苏F4)400X.jpg 这是400倍镜下照片 这是400倍镜下照片

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作者: ambassador    时间: 2010-5-31 08:36

我觉得应该是黑胶虫，而且相对来说还比较严重，你对比这张图！
/ d( @  ]3 j$ T6 v/ h" O6 Q% d 黑胶虫 " ^+ w, i- j$ P- s
& [7 P% D  J8 M0 \2 G( ?
这是丁香园上的链接：
) u) w1 D4 J6 vhttp://tong.dxy.cn/experiment/430/488/497/17488_2.htm

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作者: 大刀无敌    时间: 2010-5-31 13:38

我声明一下，黑胶虫是一种根本就不存在的东西，是一些学者找不出真正污染的原因所定义出来的成分不明的东西。此图可能是支原体污染，建议做支原体检测。还有可能是原代培养传代次数过多，或培养时间不够传代频繁导致营养缺乏所致。
作者: weianh    时间: 2010-5-31 14:33

换血清试试
作者: lili9999    时间: 2010-5-31 14:41

看一眼细胞觉得真的是惨不忍睹，和我原来有一次的细胞状态差不多，不能要了，我当时也很舍不得，但留着又怕把别的细胞污染了。我曾经每次染菌后都做过细菌培养，有的是真菌感染、有的是空气中常见的细菌感染，但未见黑胶虫感染。支原体感染听说过，但一般处理过的血清好像都没什么问题。大肠杆菌感染培养基有臭味，真菌感染有菌丝，你这样的看看是不是念球菌感染，一般可看见串珠。
作者: cortex    时间: 2010-5-31 15:34

看样子是支原体污染，上传两张图片，搂主比较一下，最好看看没有细胞的那一张，你的出现这种情况没有，如果是。建议使用plasmacin！可能还有救！

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作者: angel-sakura    时间: 2010-5-31 23:15

首先，你做的是传代还是原代，我养的MC3T3到40代后细胞内也会有许多颗粒状的东西，是细胞老化的表现，如果是污染的话细胞应该早就死亡并飘起来，不会和细胞共存的。并且污染物一般都会快速增值并占满整个视野，不知道后来你是否出现这种情况。如果是老化的话可能是你处理不当，或者改用了血清之类的。此外，那些细胞旁边的黑色颗粒我觉得可能是细胞碎片。
作者: wshzhoum    时间: 2010-6-1 16:30

那些颗粒状小体会不会随着时间变多？考虑应该是污染，实验室最近有人白色念珠菌污染，镜下看起来很像，楼主参考一下吧~
作者: kiesheep    时间: 2010-6-1 20:31

你的黑色点点会不会动的？？
作者: initiation    时间: 2010-6-2 17:18

有些学者推测黑胶虫对细胞并没有害处，反而有修复细胞的功能。你这个可能是支原体感染。不过具体是什么？需要你设计一些小实验来验证具体是什么，说不定会有新发现，加油！
作者: Rena    时间: 2010-6-2 17:37

我的细胞HUH7也出现这种情况，天津TBD特级养的，背景很脏，而且可以看到好多小黑点在动，但培液不混浊。两三天不换液的话细胞会被这些小黑点吃掉，细胞完全裂解成黑色絮状结构。换了进口血清后，情况明显好转，建议换好的血清。。。
作者: 绿雪    时间: 2010-6-2 23:03

本帖最后由 绿雪 于 2010-6-2 23:08 编辑 + S3 `: L$ E9 S* Y2 ?5 m. D
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非常感谢大家的关注和帮助！细胞是第四代的，看细胞这种状态，后来我10天左右不去换液，培养基一直不会变浑浊，都差不多那样的，只是那些小黑点越来越多。高倍镜下能看到那些小喝点在动的，而且一开始好像都是在细胞里面的，然后细胞核就逐渐溃散了，但细胞不会飘起来。
作者: 绿雪    时间: 2010-6-9 21:33

回复 8# 大刀无敌
$ M' w) w1 ^5 A" h/ |! W2 F4 r: ^8 [, @! @+ }7 G; z
我查了关于支原体污染的资料，确实有点像。8 M; z5 [2 E7 X  E
    “支原体污染后 ，因它们无致死细胞毒性，故可与培养细胞长期共存，培养液一般 不发生混浊 。轻度污染时，细胞无明显变化，外观往往给人以 正常的感觉，实则细胞受到多方面的潜在影响，合成，抑制细胞生长；污染较严重时，细胞间隙和细胞内都有大量的黑色小颗粒，细胞状态明显不好 ，如折光消失，缺乏立体感等。”" V$ ]7 r( `# S) E0 y$ T
http://www.bioon.net/bbs/viewthread.php?tid=313571
作者: hndxws    时间: 2010-6-9 22:22

说“黑胶虫是一种根本就不存在的东西”有点武断。这些黑点可能不是生物，但也有可能是。我同样不赞成轻易用一个不知道是什么的东西来试图解释手中的现象，认真寻找原因才是正道。+ D; p" I$ _0 @. P7 B
作者说，“培养液没浑浊，细胞也不会死，放置几天都一个样”，这说明可能不是污染，但并不能说明黑胶虫不存在。我觉得这应该与污染关系不大，很可能是血清质量不好，或者血清在解冻时没有处理好，导致培液里面营养物质被变性沉淀造成的。# J* O  S4 @, c! M$ x
我觉得问题是搞清楚这小黑点是什么时候出现的，这样可以缩小找原因的范围。
作者: lixiaodong    时间: 2010-6-9 23:01

学习了。
作者: angel-sakura    时间: 2010-6-10 23:00

对于支原体的污染我想发表点意见，逼近最近刚学的微生物，支原体在体外是很难培养的，需要的条件较高，要加10~20%的动物血清，其他条件也比较苛刻，所以以培养细胞的条件一般是无法形成油煎蛋样的菌落。此外，我养的细胞也出现过这种情况，那是我用过氧化氢诱导细胞衰老时出现的。。。。。
作者: 绿雪    时间: 2010-6-11 11:03

本帖最后由 绿雪 于 2010-6-11 11:06 编辑
1 `* a) p4 E' v2 L* b5 W0 i8 @0 i, i
回复 21# angel-sakura
4 z. n9 J1 n7 d# z; X4 f  Y/ E' {: G
敢请教angel-sakura ：那么这样说这种情况是细胞衰老的表现吗？细胞衰老都有些什么样的表征呢？能否详细的给予解答，最好附写图片。谢谢！
作者: 大刀无敌    时间: 2010-6-12 07:45

回复 19# hndxws
9 `! D8 G. j, P. g; w6 b! V. \* r# g$ F
黑胶虫就是一种不存在的东西，你查看各种资料的污染源有没有具体把黑胶虫分类，其乃何种生物，动物植物还是微生物，有学者说碳颗粒有的说是生物体但是在电镜下也没有看到其结构，所以说黑胶虫就是一种不存在的东西，只是大家不知道那是什么所以定义是黑胶虫，今天说支原体是黑胶虫明天酒精灯燃烧灰是黑胶虫，如果你说存在黑胶虫请说明其结构物理化学及生物学特性。如果必须说黑胶虫存在那他可以理解为多种不知道的生物或非生物的统称。例，就如今天你看到一种生物你说不认识你定义为不知道，明天你又看到一种生物不认识你又定义为不知道，久之不知道就等于黑胶虫。
作者: angel-sakura    时间: 2010-6-12 21:17

回复 22# 绿雪
$ S, l; C' o3 ?: z- c是不是衰老需要需要进行检测才知道，我只能说你细胞的状态和我过氧化氢诱导细胞衰老的状态很相似。细胞衰老时细胞的一种特殊的生理状态，此时细胞内蛋白表达谱发生变化，形态也发生改变（一般是变扁平宽大），但一般无法单凭显微镜来判断。不过衰老的一个特点就是细胞不再进行分裂，只要换液的话就仍能存活一段时间，不过最终还是会凋亡的。
; _% L" V" Y* S$ }! \ GAL mBMSC.5.23.jpg 8 q' ?5 e8 g$ |9 {% L$ O. Y$ `6 L
这个是我用β-GAL kit染色的，染成蓝色的为衰老细胞。

图片附件: GAL mBMSC.5.23.jpg (2010-6-12 21:11, 217.74 KB) / 下载次数 78
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作者: Robert-A    时间: 2010-6-13 09:50

把你用的培养液和血清都过滤下，再有就是你得血清不要反复冻融；操作时注意快速，减少细胞在外暴露时间
作者: hljzyydx    时间: 2010-6-26 00:51

回复 8# 大刀无敌 2 v0 U' J2 T& ]$ b. D
7 u; M! C" u) m# ~

2 L2 E! `+ z  ^& D, M7 o   哦？是么？根本没有黑胶虫啊。。。
作者: Robert-A    时间: 2010-7-30 15:35

细胞缺少营养，检测下你的培养液看看是不是某成份有问题，重点关注下谷氨酰胺和血清



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