干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 六孔板加胰酶量 [打印本页]

作者: 1195963542 时间: 2016-1-17 19:16 标题: 六孔板加胰酶量

本帖最后由 1195963542 于 2016-1-17 19:16 编辑
* ~+ J8 {: _8 m! H# T
6孔板加胰酶的浓度和胰酶的量推荐是多少呢

作者: king8 时间: 2016-1-17 20:36

1ml够了，前提是要覆盖上整个底面。控制时间在5min内

作者: nichifanlema2 时间: 2016-1-18 08:59

回复 1195963542 的帖子8 t+ b v. T; p2 }* y

0.25胰酶（不含钙、镁离子，含EDTA），6孔板的一个孔加0.5ml-1ml即可，消化时间根据细胞类型和细胞密度不同，一般为2-5min。

作者: Tracy-Cui 时间: 2016-1-18 09:14

加0.25的胰酶，每孔500微升-1mL，最好在37度反应2-5分钟，过程中可以显微镜下观察，细胞呈圆亮的状态，飘起来了就可以终止消化了。

作者: hefan1234 时间: 2016-1-18 10:46

加0.25胰酶（不含钙、镁离子，含EDTA），每个孔加0.5ml-1ml，放入细胞培养箱可以加速消化，消化时间根据细胞类型和细胞密度不同，以镜下观察细胞呈圆亮的状态脱离底面为准（即刻终止胰酶消化作用）。

作者: 121qwq 时间: 2016-1-18 11:12

回复 nichifanlema2 的帖子: t; Q* a' d' j, L4 q! G

正确

作者: yinchong42 时间: 2016-1-19 00:12

EDTA胰酶的话，300ul足矣，但是很奇怪的是，如果是24孔板，则需要至少500ul，不知有没有其他人发现了这个现象呢？

作者: saliai2016 时间: 2016-1-19 14:55

0.1--0.25的胰酶，6孔板的话每孔0.5-1mL，最好在37°左右5分钟，过程中可以显微镜下观察，细胞飘起来了就用血清类终止消化，如果是用来传代就去离心把胰酶离掉。

作者: 1195963542 时间: 2016-2-2 13:30

回复 king8 的帖子

谢谢

作者: 1195963542 时间: 2016-2-2 13:31

回复 nichifanlema2 的帖子6 }1 @' U3 f, [/ Q( ]1 l9 C7 k
0 p) F7 ]- O; ?2 r# A
谢谢

作者: 1195963542 时间: 2016-2-2 13:31

回复 Tracy-Cui 的帖子5 g' \8 s5 G* U

谢谢

作者: 1195963542 时间: 2016-2-2 13:37

本帖最后由 1195963542 于 2016-2-2 13:41 编辑 0 d5 a+ K3 L& ~9 C
& G& x) G4 a, q6 Y& h
回复 hefan1234 的帖子' V1 C; c; @" Y+ a3 h
7 S1 C1 M M( v: R( U7 H+ Q# m6 v
当未脱离底面，但细胞间粘连消失时可不可以物理敲击使细胞脱落然后终止消化？

作者: hefan1234 时间: 2016-2-2 17:05

回复 1195963542 的帖子

最好还是等细胞变圆之后再轻轻敲击，其实本来是不应该物理敲击的，但是有些细胞贴壁比较牢固，胰酶作用时间太长对细胞膜的损害越大，所以轻轻敲击加速细胞脱落，其实用移液枪吸液吹打培养瓶底面也是可以的。

作者: 1195963542 时间: 2016-2-3 17:38

回复 hefan1234 的帖子

好的谢谢

作者: zmfang555 时间: 2016-2-4 19:45

还得看你是什么细胞，如果是293，293T等贴壁不牢容易消化的细胞,6孔板0.25%EDTA每孔加250UL足已，一般3min就有针眼状出现，这时就可以准备血清终止消化了，如果消化的细胞继续传代，胰酶应尽量少加，覆盖孔底即可，如果用来做实验，稍微多加一点无所谓，但是应尽量减少消化时间，以免对细胞造成伤害。

作者: 蚂蚁上树 时间: 2016-5-12 15:17

加入200-300ul就可以了，足以覆盖孔板底面，然后放到培养箱消化，快的话半分钟，慢的话3-5分钟，放到镜下观察，细胞变圆就可以终止消化，终止时用枪头吹打下，就可以了。

作者: 晗晗 时间: 2016-5-27 14:26

少于1ml，零点几毫升吧

作者: 随时准备下线 时间: 2016-6-7 07:42

回复 yinchong42 的帖子
- Y; `5 X0 l: _! ~. ?# |
24孔板边缘效应严重，加入的胰酶不是平铺在孔底的，为了达到覆盖全部孔底，必须多加

作者: sfnana 时间: 2016-8-30 15:47

我们一般加1ml，0.25%胰酶（含0.04%EDTA，无钙镁）,消化2分钟左右，镜下观察细胞变圆，加等体积的培养液中止消化，用枪轻轻吹打细胞，收集离心，进行下一步。胰酶对细胞的伤害比较大，所以镜下观察，及时终止消化非常重要。

作者: UlissesJR 时间: 2016-9-5 09:12

无论用什么类型培养器皿，加胰酶的量能够覆盖底部即可，多了也是浪费

作者: 晗晗 时间: 2016-10-9 15:46

少加一点就行了,不用1ml,在37摄氏度条件下消化5分钟即可

作者: 吃呆猫 时间: 2016-11-17 10:44

0.5ml 0.05%的胰酶（干细胞），肿瘤细胞 0.25% 0.25ml。加完后摇晃一下吸的剩一点再消化

作者: breakutopia 时间: 2018-7-11 10:45

有没有人遇到过干细胞被消化起来，但是没有办法吹散成单细胞还是一个很大克隆团的问题呢

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn/)