大鼠急性心肌梗死模型的建立和心肌内移植手术步骤:

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(1)给予大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉。剪去胸前区和部毛发。用碘伏消毒两遍。- ?" d. `+ @' ]) M, P9 g3 U9 D
(2)在相当于颈6水平横形切口剪开颈部皮肤，分离皮下组织及肌肉，露气管。用22号套管针行气管穿刺，进入气管后，拔除针芯，连接动物定压呼吸机。行间歇正压通气，频率为50~60次/分，调节压力见到胸廓起伏为准。4 H, d( i% z4 u% c$ _$ _: t
(3)沿胸骨左缘3、4肋间逐层剪开皮肤和皮下筋膜，撑开肌肉，断第肋，打开胸腔，剪开心包，露出心脏，用4号小圆针及0/5丝线在左耳下缘约5mm处结扎冠状动脉前降支。
% j: s: K: ]  i9 _9 y4 ](4)观察20min后，左心室前壁颜色变苍白，收缩力减弱，认为心梗模建立成功。在心梗结扎的下方左心室的心梗区边缘区分5点，用微注射器在心肌浅层注射2×106个已标记的BMSCs(50ul/点)
) W, u  }7 N( k7 k& W" d(5)观察没有出血后，关闭胸腔，在切口上撒青霉素粉预防感染，再关肌肉及皮肤。逐层关闭颈前区切口。待呼吸平稳后，拔出气管插管给予低流量吸氧2小时。术后连续3天腹腔注射青霉素8万U/只。
& s4 @# J- H( g* h" B6 l0 D% [2. 移植细胞的观察; X4 x7 ~9 ^5 }. @4 F1 w& V
分别在细胞移植后1周、2周、3周和4周，每次取2只大鼠心脏，冰冻片，在荧光显微镜下观察移植细胞。1 H9 u# l" U4 w
(l)大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，剪开胸腔，取出心用冰冻生理盐水洗净。! V/ M0 F, t0 z/ [3 q3 B7 S( K
(2)将心脏用胶水包埋后，放入冰冻切片机冷冻，约15min后，进行切切片厚约为8μm。
2 e+ ^0 m  e6 d7 Q. Q+ e2 {3 P(3)将切片放在一20℃的丙酮中固定15min，再用PBS洗3次，5 min/次，避光保存于一20℃冰箱中。
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