发一个造血功能重建实验的方案，请指正！

ciweiyuan

细胞移植前的24小时，用325 cGy 半致死剂量处理8到10周大的小鼠，同时腹腔内注射CD122抗体（ 1 mg ⁄ mouse
& N$ n6 Q! }7 o/ H），把造血干细胞通过静脉注射的方式打到小鼠体内，移植6到8周后，处死小鼠进行造血功能重建的分析。

FreeCell

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？
, f3 K+ ?- j( Q" G6 I# m2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？
- x) F$ ?  ?9 c3 c3、造血干细胞移植数量是多少？
: v- Z" n+ e) x0 ~: w4、用什么做对照？$ @( z5 Q7 y  q' A: O# @
5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？
; J  E% x% g: B6、用什么指标评价移植是否成功？

ciweiyuan

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？
3 ]- T/ v0 H9 j9 G0 E) b3 Q是的，这个是我没有说清楚/ c* B# b& T7 [" E) b
2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？
: T. u: F# k& G这个是我从文献上看来的，希望有经验的伙伴们给些建议1 I0 B* b. t, V% ?
3、造血干细胞移植数量是多少？
! t- d# M) C, Y7 W我想10的6次方是否够了呢
) }- X% O# j+ G4 Cl4、用什么做对照？' M0 W9 W- g5 B1 P0 \( a( d4 i
培养基可好: w0 V: i: u$ Y3 A) b
5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？
1 B9 i( E8 y: [4 O  R$ Q中和抗体？文献上看来的
6 S3 v5 M( a! S$ n' o8 r8 W6、用什么指标评价移植是否成功？" h! X( \) q/ J. T! Y% U) Y
取骨髓中的细胞上流式鉴定cd45，cd19，cd90？
$ Q" I; t1 P* N" b( f才疏学浅望大家多多帮助。

各输己键

ciweiyuan 发表于 2013-12-11 14:12 $ k/ \) A# o- t2 X
1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？
9 e4 |+ g) {  O是的，这个是我没有说清楚
3 |, @3 V, V2 W1 `# ?  {2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？

1 f; ~7 I5 p- b, I
文献看的很好，几个问题值得商榷。, j3 `+ {0 R% Y- U; Z+ [: {7 a8 @
1. 这个小鼠造模的干细胞来自何处？人还是小鼠？& B6 }7 f7 Y; {
2. 24小时说来应该是相对最为规范的了，4h、6h、过夜都是常有的方法，但是不少学者认为6h这样的处理方式可能出现细胞因子风暴引起供者细胞损伤。) F8 }1 k2 |+ [, v4 k
3. 10的6次方应该是很大一群了吧，做造血干细胞的单个干细胞都可以进行移植，如果按照这个标准的话，10的6次方恐怕会把老板打哭的。0 m3 m! B' A# c4 v$ n
4. CD122，干什么用？IL-2β链，清除NK么？为何不用pk136或者NKp46抗体。

ciweiyuan

请问你们常说的造血干细胞是指什么，我默默的把cd34阳性的细胞认为是干细胞了

ciweiyuan

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: @. Y; z- W( y( V0 m4 G  Q. M; n6 y5 U7 B5 [
什么是细胞因子风暴？ 一般移植要用800-4000个造血干细胞吗，很是迷茫，望指点

crazytime

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! B4 B0 s; n; B1 ~7 M% Y
$ _! ~+ d; F+ s' n. ]我觉得数量应该根据体重来，对照用培养基不太好吧) M# S0 _2 I; m+ }# R: G, {

ciweiyuan

回复 crazytime 的帖子3 H4 n4 C+ g3 w; ^/ f2 S6 h
( _, w  |7 {" k. e
可能pbs更合适一些

goblinwang

3 {2 w; J' p, C8 b1 X

. H2 l. K3 ^) F对照应该是用不加因子，不加血清，不加双抗的基础培养基，比如我用的IMDM，移植的时间选择，我觉得辐照4-6小时内进行，比较好，至于腹腔注射抗体抑制免疫排斥，我没怎么注意，致死剂量照射，免疫系统基本都缺失了，不过我移植实验最后存活率只有50%多点，不知道其他细节是不是产生了影响，如果你有好点的意见和方法可以共同探讨，

ciweiyuan

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: h! r3 C) _# L3 c- ?
% k  n0 p) x( m) q. Q2 t: U存活率低是否和辐照的剂量有关？，你一般移植多少细胞量呢