肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；+ S$ K% Y' E9 g: l) [& S
无菌生理盐水洗3次；
. K' J* X5 C" w0 t" g用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；/ L$ }( I' U, p% e" {
200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；
1 z+ }6 X7 q. l6 c6 @用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；  M" P6 |) f8 P. f$ v
将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；5 x4 s" q2 f, o( a# }
注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。. P4 g6 r# P) z' S$ Y  @
将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。, j. @' v4 E5 {1 H; E+ t6 J
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以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？